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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » PCR用Taq酶还是pfu？
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ltf82

铜虫 (初入文坛)

[交流] PCR用Taq酶还是pfu？

PCR高手们，请问大家做PCR时用Taq酶还是pfu？如果用Taq出现碱基突变的几率高嘛？有经验的虫友赐教！
还有一般PCR是不是循环次数越多，出现突变的几率也越高啊？
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1楼 2008-03-06 17:10:57
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biocore

★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):xiexie 欢迎常来,.兄弟很热心.
和你扩增的长度，以及试验要求有关系。
普通试验，用Taq就可以了。
如果长片段，并且实验要求高，那么就要高保证酶。
一般的高保真酶，里面是混杂普通的Taq和Pfu。
NEB有一款phusion酶，是保真性能，目前最高的。
PCR循环次数越多，出现突变的几率，不会变高，突变几率只和酶本身的特性有关。
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2楼2008-03-06 17:20:07
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ltf82

铜虫 (初入文坛)
我的目的片断在1500bp左右，PCR扩增是用来表达的，那需要用高保真酶嘛？扩增温度在50度左右，突变几率怎样阿？
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3楼2008-03-06 18:43:31
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biocore

★
reasonspare(金币+1,VIP+0):xiexie 欢迎常来,.谢谢交流
呵呵，基本不需要，1.5k的，扩出来，测个序，看看，应该不会有什么错配
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4楼2008-03-06 19:20:35
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ltf82

铜虫 (初入文坛)
我就担心突变之后中间产生终止密码子，就表达不了了
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5楼2008-03-06 19:43:22
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)
★ ★ ★
reasonspare(金币+3,VIP+0):xiexie 欢迎常来,.兄弟很热心. 新虫鼓励奖2个
理论上说puf更耐高温，校正能力更强。
PCR的循环次数越多，体系越不适合合成DNA。
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6楼2008-03-06 21:02:14
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