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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 分析电泳图，求神人过来啊~~救命啊~~！！！指点啊
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小小鱼泪了

新虫 (初入文坛)

[求助] 分析电泳图，求神人过来啊~~救命啊~~！！！指点啊 已有2人参与

这个是我今天做的水果RT-PCR,从左到右分别是Mark，CAT酶，18sRNA，提取的总RNA, 提取的总RNA，Mark
刚开始觉得mark没点好，重新点的。
扩增目的基因，体系20微升，10×Buffer Mgcl-  2微升 ； dNTP 1.5 微升 ； Mgcl2 1.5 微升 ； 模板cDNA 3 微升 ；Taq酶 1微升（稀释10倍的）；超纯水 9 微升 ； 引物 CAT上下游各1微升 ， 18S上下游各1微升。（引物先加完后煮沸了5分钟）。mark是500的
真心不知道我这个怎么回事，条带跑出来暗暗的，总RNA没提好么？？？我这RNA能从图里看出来什么问题么？？？怎么样才能跑出来亮一些？？？谁会看电泳图啊，真是救命的啊，拜托啦

分析电泳图，求神人过来啊~~救命啊~~！！！指点啊
20140421.JPG
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1楼 2014-04-21 18:05:23
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小小鱼泪了

新虫 (初入文坛)
为什么木有人。。。。。。。呜呜，不要这样啊
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2楼2014-04-21 19:22:50
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kueradi

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
“引物先加完后煮沸了5分钟”， 为什么要煮沸呢，不是直接上PCR仪吗？
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3楼2014-04-21 23:24:13
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lanhaizhixin

木虫 (著名写手)
煮沸不会是为热失活逆转录酶吧

[ 发自小木虫客户端 ]
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4楼2014-04-22 02:58:07
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小小鱼泪了

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by kueradi at 2014-04-21 23:24:13
“引物先加完后煮沸了5分钟”， 为什么要煮沸呢，不是直接上PCR仪吗？

减少引物二聚体的形成

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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5楼2014-04-22 08:44:18
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小小鱼泪了

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by lanhaizhixin at 2014-04-22 02:58:07
煮沸不会是为热失活逆转录酶吧

我只煮了引物啊

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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6楼2014-04-22 08:50:08
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kueradi

金虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 小小鱼泪了 at 2014-04-22 08:44:18
减少引物二聚体的形成
...

那你下次试着不煮做一次？没听说要煮沸的呀。
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7楼2014-04-22 11:09:02
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jiaolong11a

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖交流！ 2014-04-24 00:01:45
看着你的RNA条带有些弥散。是不是降解了呀
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多情总被无情扰。。。愁
8楼2014-04-22 11:25:53
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小小鱼泪了

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by kueradi at 2014-04-22 11:09:02
那你下次试着不煮做一次？没听说要煮沸的呀。...

第一次做过没煮沸的，可是跑的也不好，条带和这个一样暗

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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9楼2014-04-22 12:16:31
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小小鱼泪了

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by jiaolong11a at 2014-04-22 11:25:53
看着你的RNA条带有些弥散。是不是降解了呀

唉。。。。。。我好忧伤啊。。。。这是降解了我该怎么办。。。呜呜

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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10楼2014-04-22 12:18:12
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