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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 酵母重组
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tom8559

新虫 (初入文坛)

[交流] 酵母重组 已有3人参与

我现在做的实验 酵母建库 用的是目的片段和质粒在酵母中重组的方法 由于转进的质粒没有启动子 我在质粒上设计表达框时加上的是native pormoter 1000bp 但是由于本身酵母的基因组上也带narive promoter 不知这样转 会不会很多转进的质粒的native promoter段都跟基因组上重组了 因为我们发现建好的库 总提不出质粒 望有经验的仁兄给予指点 谢谢

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1楼 2014-04-20 23:06:24
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远洋精灵1991

金虫 (小有名气)
★
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请问你找到解决方法了吗？跟你有相似的问题，另外，你片段PCR的时候下游引物是不是在终止子上，觉得终止子不同，应该下游没办法整合到genome上。
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2楼2014-06-02 10:37:29
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Neo2000

木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
你提质粒用的什么方法？

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3楼2014-06-02 16:52:03
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tom8559

新虫 (初入文坛)
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2楼: Originally posted by 远洋精灵1991 at 2014-06-02 10:37:29
请问你找到解决方法了吗？跟你有相似的问题，另外，你片段PCR的时候下游引物是不是在终止子上，觉得终止子不同，应该下游没办法整合到genome上。

问题解决了，后来就都提得出来了。可能是之前筛的表型不对或环境原因造成的，总之没有改进方法。

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4楼2014-06-03 20:29:43
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tom8559

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by Neo2000 at 2014-06-02 16:52:03
你提质粒用的什么方法？

提酵母质粒试剂盒

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5楼2014-06-03 20:33:20
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Neo2000

木虫 (著名写手)
★
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5楼: Originally posted by tom8559 at 2014-06-03 20:33:20
提酵母质粒试剂盒
...

转化大肠杆菌效果如何？

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6楼2014-06-03 20:43:29
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寒冰fire

银虫 (小有名气)
★
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我也想请教一下，你们转化是电转化，还是原生质体转化，我也遇到过这种情况，也是导入一基因组和一个线性载体，最后也是提质粒提不出来，不知道是重组效率低，还是提的方法不对，我们没有买试剂盒

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doit
7楼2014-06-03 23:05:04
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tom8559

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by Neo2000 at 2014-06-03 20:43:29
转化大肠杆菌效果如何？
...

很好

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8楼2014-06-04 09:49:02
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tom8559

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 寒冰fire at 2014-06-03 23:05:04
我也想请教一下，你们转化是电转化，还是原生质体转化，我也遇到过这种情况，也是导入一基因组和一个线性载体，最后也是提质粒提不出来，不知道是重组效率低，还是提的方法不对，我们没有买试剂盒
...

我们做的是电转，主要你目的片段和质粒的同源区域有多长，太短了比较难重组。

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9楼2014-06-04 09:51:03
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