24小时热门版块排行榜    

查看: 2884  |  回复: 37
当前主题已经存档。
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

guoqin_shiyin

银虫 (正式写手)

[交流] 急!急!急!为什么克隆总是失败?(散100金币求助)

做分子克隆做了快一年了,可是除了有两次运气好连接上一个片段后,再也没有做出来过.

都快急死了!不明白到底是哪里出了问题,请高手指点啊.

一般质粒切3-4个小时,PCR产物片段一起切,然后电泳回收,按照浓度大概8:1--10:1的比例连接,质粒一般用量为50-100ng.转化,然后挑斑,可是总是失败,请问为什么呀?
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

model031

银虫 (正式写手)

★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):xiexie 欢迎常来,.
说实话,做克隆有时候要看运气,运气好,不出一月就可以出来结果,运气不好,可要多花点时间了.我的情况跟楼主你的差不多,我开始的连接很幸运,挑了12个基本都是阳性的.我载体是8400左右,片段620左右 我载体的用量20ng,载体片段的摩尔比是1:5  我们实验室也有按1:100连的,反正就是载体尽量少,加大片段用量,你再试试.
19楼2008-03-07 09:36:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 guoqin_shiyin 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
信息提示
请填处理意见