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guoqin_shiyin

银虫 (正式写手)

[交流] 急!急!急!为什么克隆总是失败?(散100金币求助)

做分子克隆做了快一年了,可是除了有两次运气好连接上一个片段后,再也没有做出来过.

都快急死了!不明白到底是哪里出了问题,请高手指点啊.

一般质粒切3-4个小时,PCR产物片段一起切,然后电泳回收,按照浓度大概8:1--10:1的比例连接,质粒一般用量为50-100ng.转化,然后挑斑,可是总是失败,请问为什么呀?
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yzdjyj

铁杆木虫 (正式写手)

★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):xiexie 欢迎常来
只要没切位点没错的话一般都能切开,连不连T载体无所谓。确保没错的前提下建议调整一下产物连接比例,不能单纯看浓度,理论上是看mol比,也就是你insert的浓度除以其大小比上vector的浓度除以其大小在3:1左右较合适。
一个成功的男人就是让他的老婆和孩子过上幸福的生活!
26楼2008-03-13 16:40:35
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