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guoqin_shiyin

银虫 (正式写手)

[交流] 急!急!急!为什么克隆总是失败?(散100金币求助)

做分子克隆做了快一年了,可是除了有两次运气好连接上一个片段后,再也没有做出来过.

都快急死了!不明白到底是哪里出了问题,请高手指点啊.

一般质粒切3-4个小时,PCR产物片段一起切,然后电泳回收,按照浓度大概8:1--10:1的比例连接,质粒一般用量为50-100ng.转化,然后挑斑,可是总是失败,请问为什么呀?
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fkz

荣誉版主 (著名写手)

小木虫互联山庄CEO


reasonspare(金币+1,VIP+0):xiexie 欢迎常来,.谢谢交流
先考虑稳定性,应该把有酶切位点片段的PCR产物先连上T载体再切, 最关键的是酶切位点,如果位点错了,那就不是运气好坏的问题了.
朔漠长歌,落日斜影,高山流水,闻弦鸣音,不求闻达,但慕归云,随喜随缘,自然而然。
22楼2008-03-07 21:10:09
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