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银小耳

金虫 (小有名气)

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6楼: Originally posted by 周志惠 at 2014-04-19 08:16:13
大肠摇菌3小时确实不会有菌出,你这是连T载体,只要片段亮度不是很淡,应该不是问题,片段是用rTaq酶P的么?白色菌落也不一定就是阳性克隆

片段是用rTAQ酶P的~白色菌落用含氨苄的平板再次验证了下~可能是假阳性吧~
11楼2014-04-20 21:45:02
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银小耳

金虫 (小有名气)

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7楼: Originally posted by zhangtao110 at 2014-04-19 09:05:33
用soc,营养高些,利于细胞壁的快速生成

哦~有空试下,谢谢啦~
12楼2014-04-20 21:45:25
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lairongpeng

银虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
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10楼: Originally posted by 银小耳 at 2014-04-20 21:43:36
我离心了下~12000rmp,1.5min ,离心管底部几乎没有菌,好像根本没有长起来,难道是我T载体没连上,之前在平板上长的是杂菌?...

平板有放amp抗生素吧?摇菌的时候放的也是amp吧?如果是,那就过夜摇菌一下,第二天应该很浑浊

[ 发自小木虫客户端 ]
13楼2014-04-20 23:55:52
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银小耳

金虫 (小有名气)

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13楼: Originally posted by lairongpeng at 2014-04-20 23:55:52
平板有放amp抗生素吧?摇菌的时候放的也是amp吧?如果是,那就过夜摇菌一下,第二天应该很浑浊
...

平板放了amp抗生素,摇菌时也放了,摇了3h没长,然后就没管它,让它过夜摇了一夜,第二天还是很清澈,不知道怎么回事,会不会是T载体没连接上呢??之前平板培养的时候因为要做其它实验就没来的及及时挑取单克隆,会不会是长得杂菌呢?
14楼2014-04-21 08:45:33
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kueradi

金虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
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9楼: Originally posted by 银小耳 at 2014-04-20 21:41:11
第二个的1是为了验证第一个的5是抗性单克隆~我也怀疑固体平板中氨苄失活了,有验证方法吗??...

液体培养基涨不起来,说明你的氨苄好着。那固体板子做的时候,可以一次少到点板子,等到培养液在手背上温不烫的时候再加氨苄,我每次到10个,最后一个刚倒下去刚好就凝固了。再试试吧。得一个一个因素慢慢排除。
15楼2014-04-21 12:23:22
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银小耳

金虫 (小有名气)

引用回帖:
15楼: Originally posted by kueradi at 2014-04-21 12:23:22
液体培养基涨不起来,说明你的氨苄好着。那固体板子做的时候,可以一次少到点板子,等到培养液在手背上温不烫的时候再加氨苄,我每次到10个,最后一个刚倒下去刚好就凝固了。再试试吧。得一个一个因素慢慢排除。...

恩,好的~着急也没用,得先找到原因,谢谢啦~
16楼2014-04-21 19:36:08
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