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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 感受态转化及阳性克隆出现问题
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银小耳

金虫 (小有名气)
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6楼: Originally posted by 周志惠 at 2014-04-19 08:16:13
大肠摇菌3小时确实不会有菌出，你这是连T载体，只要片段亮度不是很淡，应该不是问题，片段是用rTaq酶P的么？白色菌落也不一定就是阳性克隆

片段是用rTAQ酶P的～白色菌落用含氨苄的平板再次验证了下～可能是假阳性吧～
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11楼2014-04-20 21:45:02
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银小耳

金虫 (小有名气)
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7楼: Originally posted by zhangtao110 at 2014-04-19 09:05:33
用soc，营养高些，利于细胞壁的快速生成

哦～有空试下，谢谢啦～
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12楼2014-04-20 21:45:25
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lairongpeng

银虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
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10楼: Originally posted by 银小耳 at 2014-04-20 21:43:36
我离心了下～12000rmp,1.5min ,离心管底部几乎没有菌,好像根本没有长起来，难道是我T载体没连上，之前在平板上长的是杂菌？...

平板有放amp抗生素吧？摇菌的时候放的也是amp吧？如果是，那就过夜摇菌一下，第二天应该很浑浊

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13楼2014-04-20 23:55:52
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银小耳

金虫 (小有名气)
引用回帖:
13楼: Originally posted by lairongpeng at 2014-04-20 23:55:52
平板有放amp抗生素吧？摇菌的时候放的也是amp吧？如果是，那就过夜摇菌一下，第二天应该很浑浊
...

平板放了amp抗生素，摇菌时也放了，摇了3h没长，然后就没管它，让它过夜摇了一夜，第二天还是很清澈，不知道怎么回事，会不会是T载体没连接上呢？？之前平板培养的时候因为要做其它实验就没来的及及时挑取单克隆，会不会是长得杂菌呢？
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14楼2014-04-21 08:45:33
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kueradi

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
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9楼: Originally posted by 银小耳 at 2014-04-20 21:41:11
第二个的1是为了验证第一个的5是抗性单克隆～我也怀疑固体平板中氨苄失活了，有验证方法吗？？...

液体培养基涨不起来，说明你的氨苄好着。那固体板子做的时候，可以一次少到点板子，等到培养液在手背上温不烫的时候再加氨苄，我每次到10个，最后一个刚倒下去刚好就凝固了。再试试吧。得一个一个因素慢慢排除。
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15楼2014-04-21 12:23:22
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银小耳

金虫 (小有名气)
引用回帖:
15楼: Originally posted by kueradi at 2014-04-21 12:23:22
液体培养基涨不起来，说明你的氨苄好着。那固体板子做的时候，可以一次少到点板子，等到培养液在手背上温不烫的时候再加氨苄，我每次到10个，最后一个刚倒下去刚好就凝固了。再试试吧。得一个一个因素慢慢排除。...

恩，好的～着急也没用，得先找到原因，谢谢啦～
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16楼2014-04-21 19:36:08
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