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蓝枫101

铁虫 (初入文坛)

[求助] DGGE 已有4人参与

最近跑了几次DGGE都出现了如下情况。为什么跑不开。用的是8%的胶，变形梯度是40到60 然后基因片段是360bp左右  电压是120v 16h  ，做的土壤固氮基因

DGGE
dgge2014.4.18.JPG
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1楼 2014-04-18 11:27:18
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cx13033236

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
zhang8826857: 金币+1, 鼓励应助 2014-05-08 20:07:04
可能是胶的浓度过高，或者提取的DNA里面蛋白量高（因为图上点样孔的亮度很高）。再有就是以低电压长时间跑试试，我们以前做的片段大小为250bp左右，用220V预跑10min后调成95V跑16h
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2楼2014-04-19 09:51:54
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lgn07521

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
zhang8826857: 金币+3, 鼓励新虫 2014-05-08 20:07:11
我感觉你要跑DGGE先要摸索条件的，我的是150V 跑4.5小时左右，条带180bp左右，胶浓度是8%的，变性剂范围是30-60，效果还可以
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3楼2014-04-20 10:20:58
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ccdeweidao

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

缩小变性剂范围试试呀
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4楼2014-04-22 17:05:42
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蓝枫101

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by ccdeweidao at 2014-04-22 17:05:42
缩小变性剂范围试试呀

缩小范围用多少啊
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5楼2014-04-24 09:53:38
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蓝枫101

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cx13033236 at 2014-04-19 09:51:54
可能是胶的浓度过高，或者提取的DNA里面蛋白量高（因为图上点样孔的亮度很高）。再有就是以低电压长时间跑试试，我们以前做的片段大小为250bp左右，用220V预跑10min后调成95V跑16h

我之前跑的PCR 没有蛋白质 ，可能是交孔里的东西没跑出来 。我的片段是345bp左右
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6楼2014-04-24 10:04:32
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cx13033236

木虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 蓝枫101 at 2014-04-24 10:04:32
我之前跑的PCR 没有蛋白质 ，可能是交孔里的东西没跑出来 。我的片段是345bp左右...

那就考虑一下胶的浓度和变性范围，再有就是点样速度尽量快些、最好要高电压预跑几分钟
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7楼2014-04-24 10:13:47
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ccdeweidao

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 蓝枫101 at 2014-04-24 09:53:38
缩小范围用多少啊...

你这胶的一半都没跑到，可以先试试40-50%，我做的条件是先200V 5min,然后再80V 16-20h。效果还不错
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8楼2014-04-25 09:09:19
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蓝枫101

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by ccdeweidao at 2014-04-25 09:09:19
你这胶的一半都没跑到，可以先试试40-50%，我做的条件是先200V 5min,然后再80V 16-20h。效果还不错...

嗯 好的，你做的也是固氮基因吗
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9楼2014-04-28 10:13:21
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libaitre

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

可以说下用的是什么引物吗？
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10楼2014-05-08 11:17:45
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