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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » 请问有什么方法能够在体内证明转录因子对启动子的作用
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奔跑的乌拉龟

铜虫 (正式写手)

[求助] 请问有什么方法能够在体内证明转录因子对启动子的作用 已有3人参与

请问有什么方法能够在体内证明转录因子对启动子的作用。体外的方法正在做EMSA，那体内都有什么样的方法呢
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脚踏实地
1楼 2014-04-17 10:13:51
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wangpeng227

木虫 (小有名气)

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★ ★ ★
奔跑的乌拉龟: 金币+3, ★★★很有帮助 2014-04-17 19:41:27
引用回帖:
7楼: Originally posted by wangpeng227 at 2014-04-17 13:05:13
ChIP，也就是chromatin IP，是体内分析蛋白质和DNA结合的常用方法。但是你需要有响应蛋白的抗体，或者带有标签的转基因材料。你研究生二年级，做个构建转基因也不过是半年就能拿到大量的转基因材料了

如果是做转录调节，可以看看原生质体瞬时转化的体系，这个做起来很快。给你篇文献看看吧
Li, Q.F., Wang, C., Jiang, L., Li, S., Sun, S.S.M., and He, J.X. (2012). An Interaction Between BZR1 and DELLAs Mediates Direct Signaling Crosstalk Between Brassinosteroids and Gibberellins in Arabidopsis. Science Signaling 5, ra72-ra72.
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8楼2014-04-17 13:07:48
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Neo2000

木虫 (著名写手)

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酵母单杂交是最常用的

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2楼2014-04-17 10:16:40
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奔跑的乌拉龟

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by Neo2000 at 2014-04-17 10:16:40
酵母单杂交是最常用的

嗯。我做的是植物转录因子。酵母单杂实验室没有文库，研二了估计时间也不太够，我想问能不能把启动子连上GUS和转录因子共转到烟草上看GUS的表达量，这能不能作为体内转录因子对启动子作用的证据？
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脚踏实地
3楼2014-04-17 10:41:11
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Neo2000

木虫 (著名写手)

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引用回帖:
3楼: Originally posted by 奔跑的乌拉龟 at 2014-04-17 10:41:11
嗯。我做的是植物转录因子。酵母单杂实验室没有文库，研二了估计时间也不太够，我想问能不能把启动子连上GUS和转录因子共转到烟草上看GUS的表达量，这能不能作为体内转录因子对启动子作用的证据？...

你做什么植物？有材料没有？

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4楼2014-04-17 11:01:15
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Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by Neo2000 at 2014-04-17 11:01:15
你做什么植物？有材料没有？
...

你那样做肯定不能及时毕业的，转基因时间更费

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5楼2014-04-17 11:01:50
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奔跑的乌拉龟

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by Neo2000 at 2014-04-17 11:01:50
你那样做肯定不能及时毕业的，转基因时间更费
...

我做的甘薯，打算稳转到烟草
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脚踏实地
6楼2014-04-17 13:04:14
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wangpeng227

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
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奔跑的乌拉龟(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-04-17 13:52:57
ChIP，也就是chromatin IP，是体内分析蛋白质和DNA结合的常用方法。但是你需要有响应蛋白的抗体，或者带有标签的转基因材料。你研究生二年级，做个构建转基因也不过是半年就能拿到大量的转基因材料了
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7楼2014-04-17 13:05:13
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奔跑的乌拉龟

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by wangpeng227 at 2014-04-17 13:05:13
ChIP，也就是chromatin IP，是体内分析蛋白质和DNA结合的常用方法。但是你需要有响应蛋白的抗体，或者带有标签的转基因材料。你研究生二年级，做个构建转基因也不过是半年就能拿到大量的转基因材料了

也想过，但是要做抗体，现在什么都没有，只能拿出去做，算算时间怕赶不上毕业前弄篇文章啊。
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脚踏实地
9楼2014-04-17 19:41:07
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奔跑的乌拉龟

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by wangpeng227 at 2014-04-17 13:07:48
如果是做转录调节，可以看看原生质体瞬时转化的体系，这个做起来很快。给你篇文献看看吧
Li, Q.F., Wang, C., Jiang, L., Li, S., Sun, S.S.M., and He, J.X. (2012). An Interaction Between BZR1 and DELLAs Me ...

谢谢！
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脚踏实地
10楼2014-04-17 19:48:42
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