【答案】应助回帖

要么好好活，要么死，拒绝半死不活

11楼2014-04-17 10:39:42

liubo4552

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果断换引物

12楼2014-04-17 20:09:13

panyurong

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在提取基因时要充分，尤其是在水浴时要变澄清才能进行下一步

13楼2014-04-17 21:28:42

apety

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感谢参与，应助指数 +1

1、模板DNA浓度有没有测过2、mix有没有问题，换成单独的试一试

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14楼2014-04-18 17:04:51

well_想太多

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我们实验室有时也是只有引物自联带,我觉得楼上前辈说的引物特异性有可能,然后就是你PCR条件.

15楼2014-04-20 10:07:33

panyurong

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第一可能是因为PCR反应条件问题。第二提取的基因量不够。

16楼2014-09-03 09:50:35

萧峰寒水

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我遇到了和你一样的问题，你解决了吗，怎么解决的

17楼2015-01-21 03:26:37

懒蛋

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Tm=60 qi bu. bu yi ding fei yao tm-5C

向钱看，向厚赚

18楼2015-01-21 05:43:18

huangchj03

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【答案】应助回帖

针对你这样的问题，我建议你首先分析你采用的引物是否靠谱，如果目标序列已知的话，先进行一下特异性分析，看一下引物是否GC含量相差太大，与模板的匹配情况、非特异结合位点情况以及引物二级结构等，如果发现问题及时通过重新设计合理引物解决，如果以上都没有问题的话，就要考虑你自身实验操作问题了，比如引物加入的量，退火温度等，祝好

19楼2015-01-21 11:34:56

happy豆happy

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【答案】应助回帖

各位大神，我也遇到同样问题，第一次PCR扩出了目的条带，同时还有二聚体，但是后来就只能P出二聚体了，而且也试过设置梯度退火温度，还是没P出来。下面是我的体系和程序
引物       1微升
模板       1微升
水          22微升
PCR max  25微升
退火温度第一次是61-67
第二次是58-63
引物的Tm值是61 和 67

20楼2015-11-30 15:53:22