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fanwq258

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
还有可能是酶的问题,不行了换个好点儿的酶试试。
要么好好活,要么死,拒绝半死不活
11楼2014-04-17 10:39:42
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liubo4552

新虫 (初入文坛)

果断换引物
12楼2014-04-17 20:09:13
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panyurong

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
在提取基因时要充分,尤其是在水浴时要变澄清才能进行 下一步
13楼2014-04-17 21:28:42
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apety

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
1、模板DNA浓度有没有测过2、mix有没有问题,换成单独的试一试

[ 发自小木虫客户端 ]
14楼2014-04-18 17:04:51
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well_想太多

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

我们实验室有时也是只有引物自联带,我觉得楼上前辈说的引物特异性有可能,然后就是你PCR条件.
15楼2014-04-20 10:07:33
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panyurong

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

第一可能是因为PCR反应条件问题。第二提取的基因量不够。
16楼2014-09-03 09:50:35
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萧峰寒水

铜虫 (初入文坛)

我遇到了和你一样的问题,你解决了吗,怎么解决的
17楼2015-01-21 03:26:37
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懒蛋

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

Tm=60 qi bu. bu yi ding fei yao tm-5C
向钱看,向厚赚
18楼2015-01-21 05:43:18
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huangchj03

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

针对你这样的问题,我建议你首先分析你采用的引物是否靠谱,如果目标序列已知的话,先进行一下特异性分析,看一下引物是否GC含量相差太大,与模板的匹配情况、非特异结合位点情况以及引物二级结构等,如果发现问题及时通过重新设计合理引物解决,如果以上都没有问题的话,就要考虑你自身实验操作问题了,比如引物加入的量,退火温度等,祝好
19楼2015-01-21 11:34:56
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happy豆happy

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

各位大神,我也遇到同样问题,第一次PCR扩出了目的条带,同时还有二聚体,但是后来就只能P出二聚体了,而且也试过设置梯度退火温度,还是没P出来。下面是我的体系和程序
引物         1微升
模板         1微升
水            22微升
PCR max  25微升
退火温度第一次是61-67
第二次是58-63
引物的Tm值是61 和 67
20楼2015-11-30 15:53:22
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