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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 层析/纯化 » 纯化预处理，去除脂类或糖类物质
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fxl530

木虫 (小有名气)

[求助] 纯化预处理，去除脂类或糖类物质 已有3人参与

小弟做一种大肠杆菌分泌表达的酶类物质，出来的液体非常粘稠，经过硫酸铵沉淀后还是比较粘稠。希望做蛋白纯化的高手们不吝赐教，如何通过预处理去除粘稠的问题！谢谢！
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1楼 2014-04-16 15:29:40
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zxy617

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

我想请教一下再用硫酸铵进行粗纯时需不需要注意什么，因为在我实验中用硫酸铵纯化时，酶活性降低了，是不是盐浓度过高，或纯化时没注意什么，导致酶失活。。。。
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5楼2014-07-03 21:01:41
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镂金居士

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
fxl530: 金币+5, ★★★很有帮助, 感谢交流 2014-04-27 22:36:47
粘性可能是菌体分泌的多糖类物质，你可以把发酵液冷冻干燥后，在加水溶解，此时多糖不溶于水。或者把发酵液放4度冰箱，多糖可沉淀。
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3楼2014-04-17 21:51:23
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fxl530

木虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 镂金居士 at 2014-04-17 21:51:23
粘性可能是菌体分泌的多糖类物质，你可以把发酵液冷冻干燥后，在加水溶解，此时多糖不溶于水。或者把发酵液放4度冰箱，多糖可沉淀。

大规模处理不合适吧，直接冻干成本高啊，之后还是需要进行溶解。生产中也不能一直丢在冷库等待沉淀吧。
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4楼2014-04-22 15:56:58
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fxl530

木虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by zxy617 at 2014-07-03 21:01:41
我想请教一下再用硫酸铵进行粗纯时需不需要注意什么，因为在我实验中用硫酸铵纯化时，酶活性降低了，是不是盐浓度过高，或纯化时没注意什么，导致酶失活。。。。

离子强度，温度，pH都会有影响，要先找到稳定性窗口

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6楼2014-07-04 13:20:45
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