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elvissong铁虫 (初入文坛)
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可否用离心机将粪便中杂质和细菌粗分离?已有1人参与
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我们实验室需要使用多重PCR的方法检测粪便中细菌(空肠弯曲菌)的存在率,因为粪便中杂质比较多,可否通过水煮法提取模板?具体有什么条件吗? 因为导师说粪便中杂质多,直接水煮的话模板质量无法保证,是这样吗? 如果杂质确实对模板质量造成影响,可否通过离心、过滤等方法去掉大多数杂质? 已知空肠弯曲菌大小约0.2-0.8umX0.2-0.8umX4um长。 细菌菌体一般沉降系数是多少呢? 我一般10000rpm转1min菌体就都结结实实的沉底了,(1.5ml)EP管。 我的思路是知道粪便杂质的沉降系数,和细菌的沉降系数,选择一个离心速度,杂质沉底,细菌留在溶液里面。 求各位大侠帮忙。 ================ 另外还想问个问题 我们实验室涉及用纸片扩散法测空肠弯曲菌趋化性,具体过程如下: 1. 采用基于脱氧胆酸钠硬琼脂法(DOC.HAP)的空肠弯曲菌体外趋化模型 刮取胰酶大豆肉汤血琼脂平板上新鲜培养的野生型空肠弯曲菌NCTClll68株或 cheA一突变株菌苔置于10 ml 0.01 mol/L PBS(pH7.4)中,混匀后5000 r/min离心30 min,取细菌悬沉淀用PBS重、离心3次,最后用PBS将细菌浓度调整至5×108 CFU/ml。用上述PBS配制0.8%琼脂(Sigma),细菌悬液37℃水浴预热10rain后与等体积0.8%琼脂(42℃)混合,倾注平板。将0.2mol/L DOC(Sigma)滤纸片(8 mm)紧贴于平板表面。平板置于5%02、10%C02、85%N2气体条件下 37℃孵育3 h后观察结果,滤纸片周围出现圆形乳白色细菌聚集环判为趋化阳性。 请问一下这个8mm的滤纸片怎么制作啊 有要求么?怎么将滤纸片的DOC浓度调到0.2mol/L啊? 另外琼脂可以换成MH培养基么,貌似MH培养基里面加了一些营养因子,还可以测趋化性么? |
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