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jiyimenglcly

木虫 (初入文坛)

[交流] SOS! HPLC的离奇问题求解

现在HPLC遇到离奇问题了
这学期刚装的柱子,以前大概有3个月没做实验的样子
单跑流动相(还未进样)
跑100%甲醇时,压力很稳定,稳定在5Mpa左右;
但是,一跑加水的甲醇后,压力变的不稳定,跑70%甲醇的时候,柱压升到14MPa左右,且有缓慢增加的趋势。
已经换过一台机器了,应该不是机器问题。流动相也重新配过一次了,配少了应该不影响什么的吧?
如果是柱子问题,那为什么跑100%甲醇的时候没有事情呢?只是一跑加水的混合流动相就出问题了呢?(我A瓶配的是10%甲醇,害怕纯水导致柱头长菌)
求教了
完全不知道是什么原因。该怎么办才好呀?
=。=!
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静水868

金虫 (初入文坛)


tianruibencao(金币+1,VIP+0):谢谢指导
是不是中间没有过渡好呢?从纯甲醇慢慢的降低,让柱子有一个平衡的过程,待一个极性洗脱的柱压稳定后再换另一极性,可以试一下
2楼2008-03-04 11:33:25
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chunboyu

铁虫 (初入文坛)

★ ★
tianruibencao(金币+2,VIP+0):谢谢指导
影响柱压高的几个因素及解决办法:
1.柱温低,升高柱温。
2.柱子污染,更换柱子或者再生。
3.流动相有气泡,真空脱气或者超声脱气。
4.使用含有缓冲盐的流动相由于室温低导致部分盐析出。彻底冲洗泵及管路系统和柱子。
5.如果柱压不稳,说明泵内或者管路有气泡。
3楼2008-03-04 13:16:25
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lgl7379

木虫 (正式写手)

回复问题


tianruibencao(金币+1,VIP+0):鼓励参与
chunboyu楼讲的对,但是由于单甲醇时柱压低,所以没有发现,但是柱压高时不稳定现象就表现了,很有可能是泵内或流动相内有气泡,
4楼2008-03-04 14:23:27
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zjwpharm

金虫 (小有名气)


tianruibencao(金币+1,VIP+0):鼓励参与
是岛津的液相吧,经常会出现柱压波动很大的问题,多冲洗可能会好些
5楼2008-03-04 17:48:06
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wanwei1130

银虫 (小有名气)


tianruibencao(金币+1,VIP+0):鼓励参与
换换保护柱试试,也有可能是保护柱的问题,我今年过年后来做的时候,压力也不稳,换了新的保护柱就好了
6楼2008-03-04 18:44:19
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tyys98

金虫 (小有名气)


tianruibencao(金币+1,VIP+0):鼓励参与
楼上几位好像都没有讲到点子上,他讲的情况属于常见的现象,纯甲醇的粘滞系数很小,如果此时的压力为5,用70%甲醇溶液时粘滞系数最大,大概就应该是这样。从结果来看,你使用的柱子通透性不是很好(如果流速小于1ml/min),如果没有连接保护柱的活可能是柱头部分有一定程度的堵塞,可以反过来用纯水冲洗一段时间,期间可以采用较高的柱温,比如60度,可以去除果胶、蛋白等杂质,如果实在不行,只好打开柱头进行修补了,或者将就着用。造成柱头堵塞的原因,很多情况是样品液不够洁净,今后注意就是了。
7楼2008-03-05 02:32:51
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jiyimenglcly

木虫 (初入文坛)

引用回帖:
Originally posted by tyys98 at 2008-3-5 02:32:
楼上几位好像都没有讲到点子上,他讲的情况属于常见的现象,纯甲醇的粘滞系数很小,如果此时的压力为5,用70%甲醇溶液时粘滞系数最大,大概就应该是这样。从结果来看,你使用的柱子通透性不是很好(如果流速小于1 ...

我用了保护柱的,现在看来先更换个保护柱芯看看。
反冲柱子不是对柱子不好么?现在老板很担心柱子有损耗影响实验。。。
8楼2008-03-05 08:53:32
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zhengcome


tianruibencao(金币+1,VIP+0):鼓励参与
应该是没有排好气或者流动相配比变化太大
9楼2008-03-05 09:25:27
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tyys98

金虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by jiyimenglcly at 2008-3-5 08:53:

我用了保护柱的,现在看来先更换个保护柱芯看看。
反冲柱子不是对柱子不好么?现在老板很担心柱子有损耗影响实验。。。

正确,我估计换了保护柱芯就会正常。另外,反冲当然会有一点影响,那是对正常色谱分离而言,如果柱子已经堵塞情况就不同了,这种情况下采用反冲肯定是利大于弊。
10楼2008-03-15 13:48:31
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