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jiyimenglcly

木虫 (初入文坛)

[交流] SOS! HPLC的离奇问题求解

现在HPLC遇到离奇问题了
这学期刚装的柱子，以前大概有3个月没做实验的样子
单跑流动相（还未进样）
跑100％甲醇时，压力很稳定，稳定在5Mpa左右；
但是，一跑加水的甲醇后，压力变的不稳定，跑70％甲醇的时候，柱压升到14MPa左右，且有缓慢增加的趋势。
已经换过一台机器了，应该不是机器问题。流动相也重新配过一次了，配少了应该不影响什么的吧？
如果是柱子问题，那为什么跑100％甲醇的时候没有事情呢？只是一跑加水的混合流动相就出问题了呢？（我A瓶配的是10％甲醇，害怕纯水导致柱头长菌）
求教了
完全不知道是什么原因。该怎么办才好呀？
＝。＝！
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1楼 2008-03-04 10:54:10
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静水868

金虫 (初入文坛)
★
tianruibencao(金币+1,VIP+0):谢谢指导
是不是中间没有过渡好呢？从纯甲醇慢慢的降低，让柱子有一个平衡的过程，待一个极性洗脱的柱压稳定后再换另一极性，可以试一下
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2楼2008-03-04 11:33:25
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chunboyu

铁虫 (初入文坛)
★ ★
tianruibencao(金币+2,VIP+0):谢谢指导
影响柱压高的几个因素及解决办法：
1.柱温低，升高柱温。
2.柱子污染，更换柱子或者再生。
3.流动相有气泡，真空脱气或者超声脱气。
4.使用含有缓冲盐的流动相由于室温低导致部分盐析出。彻底冲洗泵及管路系统和柱子。
5.如果柱压不稳，说明泵内或者管路有气泡。
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3楼2008-03-04 13:16:25
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lgl7379

木虫 (正式写手)

回复问题

★
tianruibencao(金币+1,VIP+0):鼓励参与
chunboyu楼讲的对，但是由于单甲醇时柱压低，所以没有发现，但是柱压高时不稳定现象就表现了，很有可能是泵内或流动相内有气泡，
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4楼2008-03-04 14:23:27
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zjwpharm

金虫 (小有名气)
★
tianruibencao(金币+1,VIP+0):鼓励参与
是岛津的液相吧，经常会出现柱压波动很大的问题，多冲洗可能会好些
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5楼2008-03-04 17:48:06
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wanwei1130

银虫 (小有名气)
★
tianruibencao(金币+1,VIP+0):鼓励参与
换换保护柱试试，也有可能是保护柱的问题，我今年过年后来做的时候，压力也不稳，换了新的保护柱就好了
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6楼2008-03-04 18:44:19
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tyys98

金虫 (小有名气)
★
tianruibencao(金币+1,VIP+0):鼓励参与
楼上几位好像都没有讲到点子上，他讲的情况属于常见的现象，纯甲醇的粘滞系数很小，如果此时的压力为5，用70%甲醇溶液时粘滞系数最大，大概就应该是这样。从结果来看，你使用的柱子通透性不是很好（如果流速小于1ml/min），如果没有连接保护柱的活可能是柱头部分有一定程度的堵塞，可以反过来用纯水冲洗一段时间，期间可以采用较高的柱温，比如60度，可以去除果胶、蛋白等杂质，如果实在不行，只好打开柱头进行修补了，或者将就着用。造成柱头堵塞的原因，很多情况是样品液不够洁净，今后注意就是了。
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7楼2008-03-05 02:32:51
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jiyimenglcly

木虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by tyys98 at 2008-3-5 02:32:
楼上几位好像都没有讲到点子上，他讲的情况属于常见的现象，纯甲醇的粘滞系数很小，如果此时的压力为5，用70%甲醇溶液时粘滞系数最大，大概就应该是这样。从结果来看，你使用的柱子通透性不是很好（如果流速小于1 ...

我用了保护柱的，现在看来先更换个保护柱芯看看。
反冲柱子不是对柱子不好么？现在老板很担心柱子有损耗影响实验。。。
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8楼2008-03-05 08:53:32
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zhengcome

★
tianruibencao(金币+1,VIP+0):鼓励参与
应该是没有排好气或者流动相配比变化太大
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9楼2008-03-05 09:25:27
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tyys98

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by jiyimenglcly at 2008-3-5 08:53:

我用了保护柱的，现在看来先更换个保护柱芯看看。
反冲柱子不是对柱子不好么？现在老板很担心柱子有损耗影响实验。。。

正确，我估计换了保护柱芯就会正常。另外，反冲当然会有一点影响，那是对正常色谱分离而言，如果柱子已经堵塞情况就不同了，这种情况下采用反冲肯定是利大于弊。
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10楼2008-03-15 13:48:31
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