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lijing740303

木虫 (小有名气)

[交流] 10金币求助两道考博题

1、一蛋白用SDS聚丙电泳分离后为一条带,请问,这个蛋白是否只有一种成分,如果还有其它成分如何分离,鉴定纯度

2、从cDNA文库中用特定一对引物利用PCR扩增一个酶蛋白基因。将该基因重组到一个通用表达载体上进行表达。对经过纯化的酶蛋白进行活性测定表明，重组蛋白具有相应酶活性。是否可以认为有关蛋白质基因表达纯化工作是否完成？为什么？
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1楼 2008-03-03 23:51:31
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biocore

★ ★ ★
lijing740303(金币+3,VIP+0):多谢，先给3个金币！
引用回帖:
Originally posted by lijing740303 at 2008-3-3 23:51:
1、一蛋白用SDS聚丙电泳分离后为一条带,请问,这个蛋白是否只有一种成分,如果还有其它成分如何分离,鉴定纯度

2、从cDNA文库中用特定一对引物利用PCR扩增一个酶蛋白基因。将该基因重组到一个通用表达载体上进行 ...

1.不一定，也可能两个蛋白分子量相同，那么一维电泳根据分子量来分离就不行了。
   跑一个二维电泳，就可以，分离了。根据分子量，电荷进行分离。
   鉴定纯度有多种方法，目前常用，且经济的就是HPLC了。

2.不可以，因为，很有可能，你仅仅克隆到，该酶基因的活性部位，可能该活性部位有活性，但在缺少其他部位的时候活性不够。或者，你克隆到了，比该酶基因更大的片段，含有多余的序列。
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2楼2008-03-04 08:25:58
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lijing740303

木虫 (小有名气)
大家帮忙啊！
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3楼2008-03-04 17:47:10
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tsingtao2008

木虫 (著名写手)

地球村村民
★
lijing740303(金币+1,VIP+0):多谢回答！
第一个问题: 可能不止一种蛋白. 所谓共迁移条带. 2-DE. 色谱
第二个问题: 还应研究增加表达量、提高活性

[ Last edited by tsingtao2008 on 2008-3-4 at 20:49 ]
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钱要流动，人要走动
4楼2008-03-04 20:45:09
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