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yanlili
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| 最近用到DNase I来去除DNA， 在网上查到需要加辅酶Ca， Mg离子，结果发现加了以后经常会出现沉淀，我认为是原液里有CO3离子的原因，产生了碳酸钙，但是这样把我溶液中的一些蛋白质也吸走了，这是我不希望的。有个同学说她们以前用DNaSE好像没有加这些离子，所以我想问到底需不需要加？有不需要加的话是什么酶，哪个公司的。 |
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最初来自牛胰腺的DNaseI（(E.C.3.1.21.1），是高度Mg2+和Ca2+依赖的，各种公司的产品都是这样。 一些公司出过改良版，现在最有名的应该是invitrogen的TubroDNase，从这个酶的产品说明看，通过改良DNaseI的催化中心，提高了对DNA的亲和力（Km），同时提高了DNaseI对一价盐离子的抵抗力。 但是其实也只字未提二价离子依赖性的问题。不过，因为TubroDNase活力较传统酶极大提高，我现在在一些体系下就直接加酶不加buffer，体系中也没有太多二价离子。 工具酶中还可以切DNA的，只剩下S1 nuclease和Micrococcal Nuclease，严格说来这两个酶并不区分RNA和DNA，并且一个依赖Zn2+，一个依赖Ca2+。 |
2楼2014-04-13 19:31:25
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