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结肠和脾脏提取RNA有不同吗？
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我用同样的方法提取小鼠结肠和脾脏的RNA，作RT-PCR，脾脏结果蛮好，都能跑出内参action，就是结肠老是出不来结果，请教各位高手结肠和脾脏提取RNA的注意要点有不同吗？？ 已经重复好多遍了，结肠老是没有内参条带出来。 我的抽提方法是用trizol法 组织取出后马上放入液氮中，后－70保存，提取时加液氮将标本碾碎，加trizol1ml碾磨，装入EP管后加200ul氯仿，离心，12000，4度， 15分种，取上清，再加氯仿重复上述步骤一遍（怕提取的东西不纯）；在吸出的上清中加异丙醇（1:1）冰上静置10分钟左右，离心：12000，4度， 10分钟，有白色沉淀在管底，用75％乙醇（DEPC水配）洗，使沉淀悬浮管中，后再离心12000，4度，10分钟，将乙醇倒去，尽量用Tip头吸取残存的乙醇，加DEPC水10～20ul溶解后行RT，用的是试剂盒，再将RT的cDNA跑内参，但是脾脏都有条带，结肠基本上都没有，我的标本的取材，保存，提取等都是同时，同条件的，（只是结肠加了一步用灭菌冰盐水快速清洗肠内容物）。都快崩溃了，是不是肠道的RNA更容易降解啊？还是我的步骤中有什么不妥的地方？请各位高手帮帮忙啊！！！ 还有由于我们实验室的某种原因，不能测OD值，而且看琼脂糖电泳结果的仪器也坏了，真是无语啊：（ 我都只能PCR后跑PAGE胶看结果，所以很郁闷 |
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