应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 设计realtimePCR引物的问题
91/1返回列表
查看: 597  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前主题已经存档。

yuyixst

木虫 (正式写手)

[交流] 设计realtimePCR引物的问题

我在设计rtpcr引物时候对一句话不是很理解，就是为了避免基因组的扩增，引物设计最好跨两个外显子，这是什么意思，请指导！！！！
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2008-03-02 12:52:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lauren180

木虫 (著名写手)

小木虫挖井人
增强特异性吧
回复此楼
细推物理须行乐。
2楼2008-03-02 13:01:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

playboy723

金虫 (正式写手)
如果跨内含子的话   那么扩出来的产物大小要比不跨内含子的大很多   这样从产物片段大小就能看出有无基因组DNA的污染     呵呵   假如不跨内含子   谁知道你扩出来的是什么啊   你能说情吗？
呵呵     这是绝密消息    一般人不愿意讲  因为我傻所以告诉你
赞一下 回复此楼
3楼2008-03-02 13:58:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ganchao1776

至尊木虫 (职业作家)
real time-pcr 叫实时荧光定量pcr
主要用于模板的定量分析

一个外显子可用于有相近或相似功能的不同蛋白质，这些蛋白的基因又在同一个基因组上，如果引物设计在一个外显子上，那么你定出来的量就有可能是几种蛋的的基因的和，把引物设计在两个外显子上就大在大降低了这个可能

说了这么多，其实和2楼的是一个意思！只是把原因给你说了一下而已！！
赞一下 回复此楼
4楼2008-03-02 14:20:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

forget1997

银虫 (小有名气)
2，3楼说的没错，跨越两个外显子是为了去除DNA污染。但不是很完全。也不是为了去除蛋白质。
测量基因表达的时候，一般是先提取total RNA然后逆转录为cDNA。可是现在所有的RNA提取方法都无法保证完全去除DNA，包括加入DNA酶。
如果存在DNA，而且你的引物都在一个外显子上，除了cDNA，DNA也会被扩出来，从而影响你realtimePCR的准确性。
为了去除DNA污染，将引物放在两个不同的外显子上。外显子通常其跨度超过数k的内含子。这样在一般情况下，DNA是无法扩增的。
赞一下 回复此楼
5楼2008-03-02 14:31:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ganchao1776

至尊木虫 (职业作家)
3楼说的也有道理，但是如果你的蛋白大的话，别跨的太多了，跨太多了你批的基因就很很大，需要的退火时间就会很长，做了20来个循环TAQ酶就不行了，S型线早早的就来了，有可能线性不好
赞一下 回复此楼
6楼2008-03-02 14:34:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ganchao1776

至尊木虫 (职业作家)
5楼的理论性最好，我支持
赞一下 回复此楼
7楼2008-03-02 14:40:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yuyixst

木虫 (正式写手)
多谢多谢，大彻大悟....特别是二楼，告诉了我一个这么绝密的消息
赞一下 回复此楼
8楼2008-03-02 18:06:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 yuyixst 的主题更新
91/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +4 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 8/400 2026-11-05 20:45 by qL1cU46YIdK0
[公派出国] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 8/400 2026-11-05 20:43 by qL1cU46YIdK0
[考研] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 8/400 2026-11-05 20:43 by qL1cU46YIdK0
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 9/450 2026-11-05 20:34 by qL1cU46YIdK0
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +4 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 8/400 2026-11-05 20:23 by qL1cU46YIdK0
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +4 hNpp4Y2CGvSC 2026-11-04 11/550 2026-11-05 20:21 by qL1cU46YIdK0
[硕博家园] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 8/400 2026-11-05 20:21 by qL1cU46YIdK0
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +5 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 12/600 2026-11-05 20:10 by qL1cU46YIdK0
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +6 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 9/450 2026-11-05 20:10 by qL1cU46YIdK0
[考博] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 6/300 2026-11-05 18:00 by My20PsvIExYO
[考研] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 11/550 2026-11-05 17:58 by My20PsvIExYO
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +5 kvewwGtKktqB 2026-11-04 13/650 2026-11-05 17:47 by My20PsvIExYO
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +5 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 14/700 2026-11-05 17:36 by My20PsvIExYO
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +5 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 10/500 2026-11-05 17:36 by My20PsvIExYO
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +4 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 9/450 2026-11-05 17:26 by My20PsvIExYO
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 9/450 2026-11-05 17:25 by My20PsvIExYO
[公派出国] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +6 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 19/950 2026-11-05 17:25 by My20PsvIExYO
[公派出国] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 7/350 2026-11-05 16:08 by My20PsvIExYO
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 9/450 2026-11-05 15:46 by My20PsvIExYO
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +4 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 12/600 2026-11-05 11:10 by PYZmcHr5kSaq
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭