24小时热门版块排行榜    

CyRhmU.jpeg
查看: 1246  |  回复: 16
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

niandzhang

银虫 (小有名气)

[求助] DNA 提取已有5人参与

烟草叶子大量提取DNA,使用法的方法为CTAB法
1、将新鲜或冻存的叶片液氮速冻后研磨成粉末
2、粉末转入到20ml 65℃预热的DNA提取缓冲液中,于65℃水浴60min,并不时摇混
3、从水浴锅中取出离心管,冷却后加入20ml 酚/氯仿混合液中,混匀10min;
4、7500g 、4℃离心10min,将上清转移到一新的离心管中,加入1%体积的RNase,37℃温育10min;
5、加入等体积的酚/氯仿混合液,混匀10min,与7500g,4℃离心10min
6、将上清转移至另一新的离心管中,重复(5)2-3次;
7、加入2/3 体积的预冷的异丙醇,充分混匀,于5000g,4℃离心5min;
8、DNA沉淀在70%的乙醇中洗一次后,与12000g 离心30s,DNA沉淀室温干燥后溶于适量体积的TE中
DNA沉淀大部分呈现为深绿色,不知道为什么,求指导啊
回复此楼
吾志所向,一往无前,愈挫愈勇,再接再励
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖交流! 2014-04-05 23:55:52
niandzhang: 金币+10, ★★★很有帮助 2014-04-22 12:52:12
氯仿抽就好,没必要用酚抽

[ 发自小木虫客户端 ]
6楼2014-04-05 19:10:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 17 个回答

e521

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖交流! 2014-04-05 00:29:52
估计是去色素去的不彻底,赢多抽提几次
2楼2014-04-04 20:22:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lvbobo823

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
niandzhang(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-04-05 15:45:12
叶绿素没去干净,酚氯仿抽提不干净。再纯化一下就好了。
hehe
3楼2014-04-05 09:28:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

niandzhang

银虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by lvbobo823 at 2014-04-05 09:28:33
叶绿素没去干净,酚氯仿抽提不干净。再纯化一下就好了。

具体方法可否告知一下,不胜感激,溶于TE的DNA应该再怎么处理
吾志所向,一往无前,愈挫愈勇,再接再励
4楼2014-04-05 12:37:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
信息提示
请填处理意见