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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » DNA 提取
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niandzhang

银虫 (小有名气)

[求助] DNA 提取 已有5人参与

烟草叶子大量提取DNA,使用法的方法为CTAB法
1、将新鲜或冻存的叶片液氮速冻后研磨成粉末
2、粉末转入到20ml 65℃预热的DNA提取缓冲液中，于65℃水浴60min,并不时摇混
3、从水浴锅中取出离心管，冷却后加入20ml 酚/氯仿混合液中，混匀10min;
4、7500g 、4℃离心10min，将上清转移到一新的离心管中，加入1%体积的RNase,37℃温育10min;
5、加入等体积的酚/氯仿混合液，混匀10min,与7500g,4℃离心10min
6、将上清转移至另一新的离心管中，重复（5）2-3次；
7、加入2/3 体积的预冷的异丙醇，充分混匀，于5000g，4℃离心5min;
8、DNA沉淀在70%的乙醇中洗一次后，与12000g 离心30s，DNA沉淀室温干燥后溶于适量体积的TE中
DNA沉淀大部分呈现为深绿色，不知道为什么，求指导啊
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吾志所向，一往无前，愈挫愈勇，再接再励
1楼 2014-04-04 18:06:09
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e521

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖交流！ 2014-04-05 00:29:52
估计是去色素去的不彻底，赢多抽提几次
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2楼2014-04-04 20:22:18
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lvbobo823

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
niandzhang(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-04-05 15:45:12
叶绿素没去干净，酚氯仿抽提不干净。再纯化一下就好了。
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hehe
3楼2014-04-05 09:28:33
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niandzhang

银虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by lvbobo823 at 2014-04-05 09:28:33
叶绿素没去干净，酚氯仿抽提不干净。再纯化一下就好了。

具体方法可否告知一下，不胜感激，溶于TE的DNA应该再怎么处理
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吾志所向，一往无前，愈挫愈勇，再接再励
4楼2014-04-05 12:37:05
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niandzhang

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by e521 at 2014-04-04 20:22:18
估计是去色素去的不彻底，赢多抽提几次

使用酚氯仿混合液再抽提吗
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吾志所向，一往无前，愈挫愈勇，再接再励
5楼2014-04-05 12:37:39
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Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖交流！ 2014-04-05 23:55:52
niandzhang: 金币+10, ★★★很有帮助 2014-04-22 12:52:12
氯仿抽就好，没必要用酚抽

[ 发自小木虫客户端 ]
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6楼2014-04-05 19:10:48
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wpwupingwp

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-04-05 23:55:59
niandzhang: 金币+9, ★★★很有帮助 2014-04-22 12:52:32
http://www.nssd.org/articles/article_detail.aspx?id=44683270
?e?f???β??~??
???????????
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南无观世音菩萨
7楼2014-04-05 20:39:18
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wpwupingwp

木虫 (正式写手)
???????:
7?: Originally posted by wpwupingwp at 2014-04-05 20:39:18
http://www.nssd.org/articles/article_detail.aspx?id=44683270
?e?f???β??~??
???????????

http://mall.cnki.net/magazine/Article/ZWXT201301012.htm
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南无观世音菩萨
8楼2014-04-05 20:42:26
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lvbobo823

铁杆木虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by niandzhang at 2014-04-05 12:37:05
具体方法可否告知一下，不胜感激，溶于TE的DNA应该再怎么处理...

也可以用酚氯仿 抽提1:1加
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hehe
9楼2014-04-07 12:20:20
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forrestgump

新虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
叶绿素没有提取干净，必须清除。
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10楼2014-04-07 13:04:49
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