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lx830618

金虫 (正式写手)

[交流] SDS-PAG电泳问题

各位虫友大家好!
  最近,实验室跑SDS-PAGE电泳时总出现电泳缓冲液在电泳的过程中变浑浊有点黑,而且电泳速度也比原来慢了很多,跑完后染色不是没有条带就是Marker模糊.这是为什么呀?谢谢各位的帮助.
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liaoqq

木虫 (小有名气)

很有可能是你们实验室的SDS-PAGE配方错误,可能是SDS的成分太多,你重新配备SDS-PAGE看看。
2楼2008-02-27 22:57:45
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lengshan1977

没有遇见过这种情况,很可能像二楼说的,配胶有问题
3楼2008-02-28 08:30:27
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puma2003

铁杆木虫 (著名写手)

会不会是缓冲液有点问题?新配的吗?
4楼2008-02-29 10:05:21
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怡然之昀

木虫 (正式写手)

marker的效果本来不好.用过几个公司的,都会慢慢变淡,随着跑的时间.
另问可以推荐一公司的protein marker吗?在此先谢谢了.
5楼2008-02-29 12:58:56
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piaoyoufeng

晶美生物代理了很多厂家的,我们实验室也是在他们公司购买的。还不错。你可以查询下。
http://www.jingmei.com
6楼2008-02-29 18:40:06
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totoro一家亲

铜虫 (小有名气)

我用过的比较好的是bio-rad的,特别是预染的,在跑胶的时候就可以看到,很好用。如果做western,转到膜上后也很清楚。不过相对贵一些
7楼2008-03-01 11:09:32
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ganchao1776

至尊木虫 (职业作家)

你的情况我从以下几个方面说
1,缓冲液用的次数太多了,电泳过程中会混浊,上面一层泡沫(明显比新配的要多的多),同电流下电泳速度会明显变慢很多
2,蛋白样品的问题,蛋白样品浓度太低,样品盐浓度太高都会跑不出条带,但浓度太低对电泳速度没有影响,盐浓度太高就对电泳速度有明显的影响了
3,胶配方,所有配方都正确的情况下,APS是只能保存两周的(我们实验室的实验说明上说只能保存一周,我用过两周的也没有问题)

从你所说的现象我的分析是这样的
1,Marker没有问题,只是经后电泳的时候多加点就会亮了
2,胶存在部题的可能性也不大
3,缓冲液到了该换的时候了
4,样品需要脱盐(这一点我不是太肯定,你换了缓冲液试一下,不行的话可能就要考虑这个因素了)
8楼2008-03-02 12:59:21
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roman852

木虫 (初入文坛)

6楼的不做western也用预染的啊,真是有m
9楼2008-03-03 15:21:40
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juting19840621

你的染色用的银染还是考染啊?还有就是标样本身的问题和电极缓冲液的纯度和使用的次数
10楼2008-03-03 17:13:38
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