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关于核磁共振做尿液代谢组学试验方法的问题 已有1人参与
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由于刚接触这个，所以问题比较多，我的试验方案是这样的，但是有几个疑惑，希望得到解答，方案如下： 进行核磁共振采集信号前，将尿液样品于室温下解冻，每个样品取400ul，加入200ull磷酸缓冲液（pH7.4，0.2M NaH2PO4/0.8 M Na2HPO4），质量分数10%重水（D2O，锁场），质量分数0.05%TSP（内标）。静置10min，再于13000g离心10min，取上清测试。 1.关于所用的PBS，我们常用的都是（pH7.4，0.2M NaH2PO4/0.2 M Na2HPO4）这样的比例配的，这个方案中用的Na2HPO4是0.8 M，这样的一个浓度设定有没有什么意义？如果我还是用（pH7.4，0.2M NaH2PO4/0.2 M Na2HPO4）这样的配制方法会不会出来的结果跟师兄的有差别？另外，可不可以直接买市售的那种固体缓冲剂直接溶解了使用？ 老师说因为样品都是水溶液，所以压水峰比较难，那如果这样的话我用重水来配制缓冲液可不可行？压水峰会不会容易些？ 2.实验方案中提到的：质量分数10%重水（D2O，锁场），质量分数0.05%TSP（内标），这里的质量分数我不是很明白，指的是占最后溶液总体积的质量分数吗？而且重水是液体一般应该用体积分数吧？方案里的PBS是用重水还是纯水配制的？ 我在其他文献上看到有这种方法：尿样取400ul，加入200ul含0.05%TSP的重水配制的磷酸缓冲液，这个方案的PBS是用重水配置的，不知道跟上面那个有什么不同？ 3.内标用TSP和DSS有什么不同？我看国外的文献中做尿液的内标大部分用的都是TSP。 3.低温冷冻离心这一步是不是必须的？有没有其他可替代的方法？ 希望得到专业解答，多谢！ |
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