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吴金连123

银虫 (初入文坛)

[求助] 如何测定葡萄糖醛酸酶的酶活？ 已有1人参与

目前我从黑曲霉中克隆了一个葡萄糖醛酸酶基因并实现了在毕赤酵母中的分泌表达，但是接下来我不知道怎么测定这个葡萄糖醛酸酶的酶活？
该选什么底物？以及测定方法及原理？
求各位大虾帮帮忙啊，不甚感激！
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1楼 2014-03-31 16:26:30
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无为之人

版主 (文坛精英)

优秀版主优秀版主优秀版主优秀版主优秀版主文献杰出贡献优秀版主

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
底物：对硝基酚-β-葡萄糖醛酸苷（PNPG ）
原理：大肠杆菌所具有的葡萄糖醛酸酶水解对硝基苯基-β-葡萄糖醛酸苷钠盐，游离出的对硝基酚呈黄色，可用分光光度计在405nm波长处测定。
方法：见附件文献
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  • 附件 1 : 葡萄糖醛酸酶提取及其活性研究.pdf
    • 2014-04-01 15:26:34, 1.07 M
人生如戏，是在高潮和低谷之间跳动的旋律！
2楼2014-04-01 15:26:49
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吴金连123

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 无为之人 at 2014-04-01 15:26:49
底物：对硝基酚-β-葡萄糖醛酸苷（PNPG ）
原理：大肠杆菌所具有的葡萄糖醛酸酶水解对硝基苯基-β-葡萄糖醛酸苷钠盐，游离出的对硝基酚呈黄色，可用分光光度计在405nm波长处测定。
方法：见附件文献

忘记说明了，我的葡萄糖醛酸酶是α型的，你的这个方法是测定β-葡糖醛酸酶的。不过还是很谢谢你
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3楼2014-04-08 19:48:27
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吴金连123

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 无为之人 at 2014-04-01 15:26:49
底物：对硝基酚-β-葡萄糖醛酸苷（PNPG ）
原理：大肠杆菌所具有的葡萄糖醛酸酶水解对硝基苯基-β-葡萄糖醛酸苷钠盐，游离出的对硝基酚呈黄色，可用分光光度计在405nm波长处测定。
方法：见附件文献

谢谢，不过我的葡萄糖醛酸酶α型的，  你提供的是测定β型葡糖醛酸酶的
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4楼2014-04-25 17:05:14
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