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a908363630金虫 (小有名气)
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[求助]
抑菌机理中关于对作用菌种的几丁质酶和葡聚糖酶酶活性的影响 已有1人参与
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求高手解惑，本人最近在做某种新提取的天然活性物质对芒果胶孢炭疽菌（一种丝状真菌）的抑菌机理的研究，其中需要测定对胶孢炭疽菌的几丁质酶和葡聚糖酶的酶活性的影响，可是总是做不出结果，吸光值很小或为负值，怀疑是粗酶液提取的时候除了问题，希望高手解答。 我的实验步骤是这样的 ： 取待测样品0. 5 g（也取过3g,5g), -15℃冷冻固定后加3. 0mL预冷的乙酸钠缓冲液(pH5.0),匀浆后冷提2h, 10 000×g离心10m in,上清液为待测酶液，上清液置于冰箱备用。后续的几丁质酶活性测定采用DMAB法，葡聚糖酶活性测定采用DNS法，反应底物分别为胶体几丁质和葡聚糖（大麦提取），。 到底是哪里出问题了酶活死活测不出来，加大菌丝量，上清液透析过夜，等等能想到的方法都想过了，难道是我研磨方法不对？我是冰浴研磨加石英砂。。。。曾静预实验的时候测出来过ＯＤ值，几丁质酶的ＯＤ能达到０．７，但是正式试验，同样的步骤死活做不出来了，请教高手谁做过类似的实验，指导我一下，谢谢。 |
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