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a908363630金虫 (小有名气)
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[求助]
抑菌机理中关于对作用菌种的几丁质酶和葡聚糖酶酶活性的影响已有1人参与
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求高手解惑，本人最近在做某种新提取的天然活性物质对芒果胶孢炭疽菌（一种丝状真菌）的抑菌机理的研究，其中需要测定对胶孢炭疽菌的几丁质酶和葡聚糖酶的酶活性的影响，可是总是做不出结果，吸光值很小或为负值，怀疑是粗酶液提取的时候除了问题，希望高手解答。 我的实验步骤是这样的 ： 取待测样品0. 5 g（也取过3g,5g), -15℃冷冻固定后加3. 0mL预冷的乙酸钠缓冲液(pH5.0),匀浆后冷提2h, 10 000×g离心10m in,上清液为待测酶液，上清液置于冰箱备用。后续的几丁质酶活性测定采用DMAB法，葡聚糖酶活性测定采用DNS法，反应底物分别为胶体几丁质和葡聚糖（大麦提取），。 到底是哪里出问题了酶活死活测不出来，加大菌丝量，上清液透析过夜，等等能想到的方法都想过了，难道是我研磨方法不对？我是冰浴研磨加石英砂。。。。曾静预实验的时候测出来过ＯＤ值，几丁质酶的ＯＤ能达到０．７，但是正式试验，同样的步骤死活做不出来了，请教高手谁做过类似的实验，指导我一下，谢谢。 |
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zhangyt7638
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