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新虫 (初入文坛)

[求助] 间充质干细胞软骨pellet诱导后怎么做切片?

关于间充质干细胞软骨pellet诱导,诱导后的pellet怎么做切片。有说冰冻切片的,步骤入下:
1、4%多聚甲醛固定24小时。
2、20%蔗糖脱水至沉底。
3、沉底组织OCT包埋,-20度恒冷箱中切片。
请问哪里是欠缺?有说的梯度浓度蔗糖脱水,各个浓度分别多久?
还有石蜡包埋切片步骤如下:
1、福尔马林固定。
2、脱水:50% 乙醇(90min)→70% 乙醇(90min)→85%乙醇(90min) →95%乙醇(90min)→100%乙醇(60min)→100%乙醇(60min)。
3、透明:1/2乙醇+1/2二甲苯 → 二甲苯 → 二甲苯,每步60min。
4、渗透: 1/2二甲苯+1/2石蜡(90min)→石蜡I (120min)→石蜡II(120min),62℃。
5、包埋:将组织放入盛有石蜡的模具中,摆好位置,于石蜡包埋机的冷台上冷却。
6、切片、贴片。
步骤是否正确?
请问这两种方法效果是否有差别?非常感谢!
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