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yzhqs

至尊木虫 (著名写手)

[交流] 没有高转速的超离怎么办啊?急!急!急!

各位虫子,我目前打算提取一类蛋白。其中有一步是,上清加入2% Sarkosyl , 100 000 g (RP-50T-2 转子,35000 r/min)离心 1 h,要沉淀部分。可是我们实验室没有超速离心机,问了问其他实验室,也没有这么高转速的超离。 就算能找到别的老师那里有超离,这么高的转速,还要离一个小时,对仪器的损伤大不大,人家会给用吗?虫子们,大家有没有这方面的经验啊,这种情况下,能不能有什么方法可以替代的呢?这个实验对我的论文很重要,大家给出出主意吧!这里先谢过了
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yzhqs

至尊木虫 (著名写手)

多谢totoro一家亲!我们实验室倒是有一台millipore的浓缩系统,好像是有5千,1万,5万分子量的几个滤膜,那我用这个来浓缩也可行吧?
还有一个问题,文献上得到的蛋白是悬浮于hepes,-20保存。我得到的浓缩液也能直接加hepes保存吧?电泳时保存的样品怎么处理呢,hepes没有影响不用除去么?
多谢多谢了!

[ Last edited by yzhqs on 2008-2-25 at 11:15 ]
4楼2008-02-25 11:03:16
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查看全部 15 个回答

totoro一家亲

铜虫 (小有名气)

★
reasonspare(金币+1,VIP+0):xiexie 欢迎常来,.
我们原来做超离,overnight的都有,所以一个小时是没有问题的。
关键是保证绝对不能停电。
具体的替代方法我也不确定,建议你查查用column纯化的方法,milipore有很多可以纯化浓缩不同大小蛋白质的column
2楼2008-02-25 10:12:15
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booksworm

铜虫 (小有名气)

这样的转速还不算太高,我做过更高的
只要有仪器,没有什么问题
3楼2008-02-25 10:54:09
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yzhqs

至尊木虫 (著名写手)

楼上说的对啊,只要有仪器就行,可是我们这里没有啊,真是郁闷。现在看文献,找方法,看到这些需要大型仪器的方法,只能望文兴叹啦
5楼2008-02-25 11:09:40
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