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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 没有高转速的超离怎么办啊？急！急！急！
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yzhqs

至尊木虫 (著名写手)

[交流] 没有高转速的超离怎么办啊？急！急！急！

各位虫子，我目前打算提取一类蛋白。其中有一步是，上清加入2% Sarkosyl ， 100 000 g （RP-50T-2 转子，35000 r/min）离心 1 h，要沉淀部分。可是我们实验室没有超速离心机，问了问其他实验室，也没有这么高转速的超离。 就算能找到别的老师那里有超离，这么高的转速，还要离一个小时，对仪器的损伤大不大，人家会给用吗？虫子们，大家有没有这方面的经验啊，这种情况下，能不能有什么方法可以替代的呢？这个实验对我的论文很重要，大家给出出主意吧！这里先谢过了
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1楼 2008-02-25 10:00:16
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totoro一家亲

铜虫 (小有名气)
★
reasonspare(金币+1,VIP+0):xiexie 欢迎常来,.
我们原来做超离，overnight的都有，所以一个小时是没有问题的。
关键是保证绝对不能停电。
具体的替代方法我也不确定，建议你查查用column纯化的方法，milipore有很多可以纯化浓缩不同大小蛋白质的column
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2楼2008-02-25 10:12:15
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booksworm

铜虫 (小有名气)
这样的转速还不算太高，我做过更高的
只要有仪器，没有什么问题
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3楼2008-02-25 10:54:09
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yzhqs

至尊木虫 (著名写手)
多谢totoro一家亲！我们实验室倒是有一台millipore的浓缩系统，好像是有5千，1万，5万分子量的几个滤膜，那我用这个来浓缩也可行吧？
还有一个问题，文献上得到的蛋白是悬浮于hepes，-20保存。我得到的浓缩液也能直接加hepes保存吧？电泳时保存的样品怎么处理呢，hepes没有影响不用除去么？
多谢多谢了！

[ Last edited by yzhqs on 2008-2-25 at 11:15 ]
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4楼2008-02-25 11:03:16
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yzhqs

至尊木虫 (著名写手)
楼上说的对啊，只要有仪器就行，可是我们这里没有啊，真是郁闷。现在看文献，找方法，看到这些需要大型仪器的方法，只能望文兴叹啦
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5楼2008-02-25 11:09:40
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dajiahaoma

木虫 (正式写手)
★
reasonspare(金币+1,VIP+0):xiexie 欢迎常来,.
在网上搜搜,现在很多大型设备网上共享,使用价格合理,很多,超速离心机等
或者很多大学\科研院所单位仪器都对外服务.


http://lab.whu.edu.cn/whuequip/equip_detail.asp?id=1

http://www.ulam.cn/sec/EquipDetail.aspx?id=416

http://yq.csti.cn/csts/typelist.aspx?id=8

[ Last edited by dajiahaoma on 2008-2-25 at 13:22 ]
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6楼2008-02-25 13:18:39
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soniabee

铜虫 (初入文坛)
★
reasonspare(金币+1,VIP+0):xiexie 欢迎常来,.兄弟很热心.
10w g,1h
速度不算快，时间相当短，
lz还是找个有对外服务的地方去离心好了

关于超滤，那个方法滤出来的不准确，我隐约记得好像是三倍范围。。。
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7楼2008-02-25 15:31:06
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yzhqs

至尊木虫 (著名写手)
soniabee能给解释下什么是三倍范围么？滤膜5千，实际上是截流1.5万的，是这个意思吗？
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8楼2008-02-25 18:34:02
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soniabee

铜虫 (初入文坛)
恩
假如你买的滤膜是5k
理论上分子量大于5k都应该离不下去
实际上分子量在1。5k的都有可能离心下去
这是我们这里做滤膜的人的经验
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9楼2008-02-26 11:24:33
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yzhqs

至尊木虫 (著名写手)
原来还有这种情况啊！不过，看你说的情况，你们的那个滤膜和我们的好像不是一种系统。你们的是不是每次用很少量的样品就可以过滤膜，还要离心的？我这里的那个仪器，每次要至少100毫升才能做，是一个竖直的加样筒，最多能加500毫升。好像是通过一个泵施加压力把需要浓缩的样品打在滤膜上，不需要离心。我们这种仪器的滤膜也会存在3倍范围的问题么？
多谢楼上的各位了！
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10楼2008-02-26 15:46:39
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