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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 药学 » 药理学 » 请较大鼠动脉环促血管生成实验的细节交流
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lisa54629

新虫 (初入文坛)

[交流] 请较大鼠动脉环促血管生成实验的细节交流

最近刚开始做大鼠动脉环的实验，有很多细节问题不是很懂，希望能有高手帮忙解答一下，谢谢！
1）如何才能将动脉里的血液都冲干净，我经常发现有残留的血液留在动脉环里
2）胶原配置的方法：我之前采用含丙酮酸钠1*DMEM稀释collagen后用NaOH调节PH，但是发现胶原凝结太快，浪费了许多胶原。
3）包埋动脉环的时候，动脉环常常漂移到培养孔的边缘而不是中间的位置，不知道这个问题如何解决
4）大多数文献上动脉环的管腔多与培养板底平行，但是我发现垂直放置似乎更加容易做到放在培养孔中间
5）用显微镜拍摄的时候，应该用相差还是亮场的，放大倍数应该多大？我看文献上都能够将动脉环和周围所生长的血管全部都拍出来的，一些彩色摄像机的参数要怎样调节比较好（我在显微镜上看的和摄像头下看到的不一样，貌似对比度差，也不是很清晰的）
6）用什么软件对所采集的图像进行快速处理？

请较大鼠动脉环促血管生成实验的细节交流
VEGF-1.jpg
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1楼 2014-03-25 16:35:37
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黄老邪01

铜虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
6楼: Originally posted by lisa54629 at 2014-04-02 16:36:21
顺便问一下你的培养基是啥？...

1640。  199都可以，个人觉得后边更好些，建议199
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我就是我，颜色不一样的烟火！！
7楼2014-04-02 20:10:41
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黄老邪01

铜虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
lisa54629: 金币+1 2014-03-31 15:30:14
辣笔v小新: 金币+2, 鼓励应助交流 2014-03-31 20:18:18
lisa54629: 金币+1 2014-05-12 21:44:08
我会用空针的针头把环挑到96孔板中，再加胶，环会很自然地变成圆形在孔中间。
血管中不会用太多血的，多洗几次就好了。用镊子挤一挤
拍照之前你加点MTT，会与活细胞中线粒体中的琥珀酸脱氢酶形成甲赞，有了颜色，拍照就好看了。
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我就是我，颜色不一样的烟火！！
2楼2014-03-28 19:20:12
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lisa54629

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 黄老邪01 at 2014-03-28 19:20:12
我会用空针的针头把环挑到96孔板中，再加胶，环会很自然地变成圆形在孔中间。
血管中不会用太多血的，多洗几次就好了。用镊子挤一挤
拍照之前你加点MTT，会与活细胞中线粒体中的琥珀酸脱氢酶形成甲赞，有了颜色， ...

那你的动脉环的管腔就是和培养皿底部垂直的那种，按照这种方法培养的话，正常的control组在培养第六天会有多少根血管？会用VEGF作为阳性对照么？
用MTT法的话旁边不是内皮细胞的细胞，如周细胞也会被染色到，这样仍然影响图像采集吧
还有你用的显微照相机的话是相差还是亮场的，目镜和物镜各放大多少倍
？
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3楼2014-03-31 15:34:53
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黄老邪01

铜虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
3楼: Originally posted by lisa54629 at 2014-03-31 15:34:53
那你的动脉环的管腔就是和培养皿底部垂直的那种，按照这种方法培养的话，正常的control组在培养第六天会有多少根血管？会用VEGF作为阳性对照么？
用MTT法的话旁边不是内皮细胞的细胞，如周细胞也会被染色到，这样 ...

回头把图发给你看，今天太晚了，被窝了都
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我就是我，颜色不一样的烟火！！
4楼2014-04-02 00:24:11
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