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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 药学 » 药理学 » 请较大鼠动脉环促血管生成实验的细节交流
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lisa54629

新虫 (初入文坛)

[交流] 请较大鼠动脉环促血管生成实验的细节交流

最近刚开始做大鼠动脉环的实验，有很多细节问题不是很懂，希望能有高手帮忙解答一下，谢谢！
1）如何才能将动脉里的血液都冲干净，我经常发现有残留的血液留在动脉环里
2）胶原配置的方法：我之前采用含丙酮酸钠1*DMEM稀释collagen后用NaOH调节PH，但是发现胶原凝结太快，浪费了许多胶原。
3）包埋动脉环的时候，动脉环常常漂移到培养孔的边缘而不是中间的位置，不知道这个问题如何解决
4）大多数文献上动脉环的管腔多与培养板底平行，但是我发现垂直放置似乎更加容易做到放在培养孔中间
5）用显微镜拍摄的时候，应该用相差还是亮场的，放大倍数应该多大？我看文献上都能够将动脉环和周围所生长的血管全部都拍出来的，一些彩色摄像机的参数要怎样调节比较好（我在显微镜上看的和摄像头下看到的不一样，貌似对比度差，也不是很清晰的）
6）用什么软件对所采集的图像进行快速处理？

请较大鼠动脉环促血管生成实验的细节交流
VEGF-1.jpg
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1楼 2014-03-25 16:35:37
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lisa54629

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
11楼: Originally posted by 黄老邪01 at 2014-05-13 10:20:18
1:1稀释  M199  环置于孔底后加1；1稀释的胶覆盖    注意 避免气泡，若有气泡可用针头或者枪头  戳破    剪动脉环是在常温操作的。胶的操作室在冰上操作的
你的SD是多少呢？...

有时候跟均数差不多大的（也确实有点大了） 我老板希望SD能够控制在均数的30%左右 。
我觉得这么大的组内差异可能是
1）动脉环在去除脂肪的过程中有损伤
2）在胶原包埋的时候，有些动脉环可能包埋的不是很好。顺便问一下你在包埋动脉环的时候有没有把动脉环表面的培养液给去掉，以免胶原被稀释？
不知道你对上述两方面有何高见？
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12楼2014-05-13 13:36:53
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黄老邪01

铜虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
lisa54629: 金币+1 2014-03-31 15:30:14
辣笔v小新: 金币+2, 鼓励应助交流 2014-03-31 20:18:18
lisa54629: 金币+1 2014-05-12 21:44:08
我会用空针的针头把环挑到96孔板中，再加胶，环会很自然地变成圆形在孔中间。
血管中不会用太多血的，多洗几次就好了。用镊子挤一挤
拍照之前你加点MTT，会与活细胞中线粒体中的琥珀酸脱氢酶形成甲赞，有了颜色，拍照就好看了。
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我就是我，颜色不一样的烟火！！
2楼2014-03-28 19:20:12
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lisa54629

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 黄老邪01 at 2014-03-28 19:20:12
我会用空针的针头把环挑到96孔板中，再加胶，环会很自然地变成圆形在孔中间。
血管中不会用太多血的，多洗几次就好了。用镊子挤一挤
拍照之前你加点MTT，会与活细胞中线粒体中的琥珀酸脱氢酶形成甲赞，有了颜色， ...

那你的动脉环的管腔就是和培养皿底部垂直的那种，按照这种方法培养的话，正常的control组在培养第六天会有多少根血管？会用VEGF作为阳性对照么？
用MTT法的话旁边不是内皮细胞的细胞，如周细胞也会被染色到，这样仍然影响图像采集吧
还有你用的显微照相机的话是相差还是亮场的，目镜和物镜各放大多少倍
？
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3楼2014-03-31 15:34:53
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黄老邪01

铜虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
3楼: Originally posted by lisa54629 at 2014-03-31 15:34:53
那你的动脉环的管腔就是和培养皿底部垂直的那种，按照这种方法培养的话，正常的control组在培养第六天会有多少根血管？会用VEGF作为阳性对照么？
用MTT法的话旁边不是内皮细胞的细胞，如周细胞也会被染色到，这样 ...

回头把图发给你看，今天太晚了，被窝了都
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我就是我，颜色不一样的烟火！！
4楼2014-04-02 00:24:11
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