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求救贴壁细胞TUNEL染色方法已有1人参与
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使用的试剂盒是南京Vazyme公司 TUNEL FITC Apoptosis Detection Kit 文章投稿使用的DAPI，审稿人要求补充TUNEL，没想到这个鬼实验这么难搞啊 我们使用的是贴壁神经细胞PC12，加药处理完毕后，多聚甲醛4度固定1h，然后蛋白酶K通透了30min，专用PBS平衡液平衡30min，最后就是染色37度孵育1h.封片。之后避光保存，由于荧光显微镜出了故障，等了大概4h开始拍照，调整参数是曝光2s，增强4.6倍。问题来了 1.不论是不加药的CK对照组，还是加药凋亡明显（之前DAPI很明显）组，镜头下几乎看不到绿光。 2.即使好不容易调节出了荧光，染的感觉也不是细胞核那种一个个圆的，而是一小片一小片的细胞整体。 请大家解惑，如何改进？或者提供经验？谢谢 |
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shaohe2013
铁杆木虫 (正式写手)
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2楼2014-03-22 09:18:21