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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白/酶 » 蛋白质荧光
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593341681

新虫 (初入文坛)

[求助] 蛋白质荧光 已有2人参与

我的蛋白质目测就可以观察到荧光，用280nm激发，在350nm（色氨酸残基）和600多都有出峰(溶剂是PBS,没有峰),我想问一下用确定的波长（如280nm）激发，蛋白质是否应该只出现一个峰？是因为我的样品不纯吗？拜托了
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赠人玫瑰，手留余香
1楼 2014-03-21 10:43:30
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回帖置顶 ( 共有2个 )

pennchem

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
593341681: 金币+5 2014-03-22 16:30:59
silicare: BioEPI+1 2014-03-27 09:39:35
350nm是色氨酸的emission，但是600nm应该不是，波长不会shift如此之多，很有可能是你的蛋白结合了金属或者其他的cofactor发出的可见光，这个需要看你蛋白是哪个家族的。
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593341681
行至水穷处，坐看云起时
2楼2014-03-21 14:22:58
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yike311

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
593341681(youlinglyw代发): 金币+2 2014-03-25 11:26:45
593341681: 金币+10 2014-03-26 19:40:23
silicare: BioEPI+1 2014-03-27 09:40:38
首先确定蛋白样品足够纯，再全波长光谱扫一下，找到最佳激发和发射，一般只有主峰。
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9楼2014-03-25 10:59:35
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普通回帖

593341681

新虫 (初入文坛)
送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by pennchem at 2014-03-21 14:22:58
350nm是色氨酸的emission，但是600nm应该不是，波长不会shift如此之多，很有可能是你的蛋白结合了金属或者其他的cofactor发出的可见光，这个需要看你蛋白是哪个家族的。

谢谢你，我的蛋白质紫外的特征吸收峰在600多
还有我想问一下，是不是用特定波长激发蛋白质只会出现一个峰？
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赠人玫瑰，手留余香
3楼2014-03-21 17:23:08
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pennchem

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
593341681: 金币+15, ★★★很有帮助 2014-03-23 21:36:38
不一定的，看你的蛋白里面有多少个官能团能被这个光激发，还有可能是你用280激发，然后色氨酸发出330nm，然后这个330nm作为激发光，然后被另一个接收，然后发出600nm的光。

你可以单独用330nm激发试试看，能否在600nm处看到?
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行至水穷处，坐看云起时
4楼2014-03-22 17:00:28
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593341681

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by pennchem at 2014-03-22 17:00:28
不一定的，看你的蛋白里面有多少个官能团能被这个光激发，还有可能是你用280激发，然后色氨酸发出330nm，然后这个330nm作为激发光，然后被另一个接收，然后发出600nm的光。

你可以单独用330nm激发试试看，能否在 ...

根据文献报道的，用620nm激发，在650nm左右会出现特征发射峰·····
现在我用280nm激发，另一个出峰的位置也在650nm附近，很郁闷，为什么会这样？你们能不能帮帮我，我看了好多这方面的书，感觉还是不太明白
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赠人玫瑰，手留余香
5楼2014-03-23 22:09:28
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pennchem

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
593341681: 金币+5 2014-03-25 09:04:08
620nm应该在可见光的范围内，做实验的时候，把窗户，灯都关上然后再看看？
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行至水穷处，坐看云起时
6楼2014-03-24 09:03:03
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593341681

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by pennchem at 2014-03-24 09:03:03
620nm应该在可见光的范围内，做实验的时候，把窗户，灯都关上然后再看看？

这都是在分光光度计中检测的，它的最大吸收峰就在620nm左右
不过在有光的地方也可以看到有荧光的
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赠人玫瑰，手留余香
7楼2014-03-25 09:06:29
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pennchem

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

盖上盖子，和打开盖子有影响620nm的峰吗？
如果用280nm以外的激发光，还能影响620nm的峰吗？
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行至水穷处，坐看云起时
8楼2014-03-25 09:17:06
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593341681

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
9楼: Originally posted by yike311 at 2014-03-25 10:59:35
首先确定蛋白样品足够纯，再全波长光谱扫一下，找到最佳激发和发射，一般只有主峰。

谢谢你，我明天去做，看一下结果
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10楼2014-03-26 19:39:59
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