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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » 没有芳香环吸收的多肽如何确定浓度
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fuyuandj86

版主 (著名写手)

己所不欲，勿施于人

[求助] 没有芳香环吸收的多肽如何确定浓度 已有2人参与

合成了个多肽,用hplc纯化完了,质谱测分子量也对
但不知道纯化完了产率多少
这才想起来多肽里没有Phe, Tyr, Trp之类的带芳香环的氨基酸, 260或280左右没有吸收没法算浓度啊
因为做了个很昂贵的反应, 大概只投了6 mg的原料~~~而且hplc纯化完了估计里面还有些盐,所以把溶剂除去后称质量肯定没希望
HPLC纯化的时候是测的215nm,肽键的吸收,可是能吸收这波长的官能团也太多了, 我这里面还有什么Arg和triazole之类的基团,没法计算啊


惨了,本来这合成里面就用到些老贵的东西了,结果做出来不知道里面浓度多少没法应用
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1楼 2014-03-21 10:18:15
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lihe131

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
fuyuandj86: 金币+15, ★★★很有帮助 2014-03-22 00:08:52
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-03-22 16:53:02
跑tricine sds-page，有个几微克就够了。积出marker的条带深浅和样品的条带深浅，然后计算浓度。
虽然不非常准，但是基本也差不了多少。
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2楼2014-03-21 10:42:55
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fuyuandj86

版主 (著名写手)

己所不欲，勿施于人
引用回帖:
2楼: Originally posted by lihe131 at 2014-03-21 10:42:55
跑tricine sds-page，有个几微克就够了。积出marker的条带深浅和样品的条带深浅，然后计算浓度。
虽然不非常准，但是基本也差不了多少。

我这多肽一共就8-10个氨基酸,分子量1.5kDa, 上胶估计就直接跑没了
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The doer of good becomes good, the doer of evil becomes evil.
3楼2014-03-21 10:53:33
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yipan

铜虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
梯度洗脱或许效果会好一些
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4楼2014-03-21 10:57:48
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lihe131

至尊木虫 (文坛精英)
引用回帖:
3楼: Originally posted by fuyuandj86 at 2014-03-21 10:53:33
我这多肽一共就8-10个氨基酸,分子量1.5kDa, 上胶估计就直接跑没了...

所以要跑tricine sds-page啊，普通的胶不行的。
给你发了个图，网上下的，1kda都能跑出来。
没有芳香环吸收的多肽如何确定浓度
images.jpg
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5楼2014-03-21 13:13:01
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