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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 双酶切后，质粒条带弥散
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JICK159

木虫 (正式写手)

[求助] 双酶切后，质粒条带弥散 已有3人参与

载体是别人赠送的，上面连有目的基因，我对其进行双酶切后，目的基因是清晰的，但是质粒却是弥散的，从质粒大小弥散到接近目的基因处。

[ Last edited by silicare on 2014-3-21 at 10:47 ]
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1楼 2014-03-21 09:22:56
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wxl.1989822

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-03-22 22:51:00
JICK159: 金币+5, ★★★很有帮助 2014-03-23 11:32:31
1.切的时间太长，酶太多，切糊了
2.其中有酶有星号活性
3.你的质粒提的不纯，有蛋白质，从表达载体中提取质粒有这个问题，试试到克隆载体里再提质粒酶切。
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14楼2014-03-22 22:22:12
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西门吹雪170

荣誉版主 (职业作家)
★ ★
JICK159(gyesang代发): 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-03-31 19:43:34
可能酶切条件不合适，温度不适宜是一个原因
赞一下(2人) 回复此楼
植根于内心的修养；无需提醒的自觉；以约束为前提的自由；为别人着想的善良
2楼2014-03-21 10:22:36
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JICK159

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 西门吹雪170 at 2014-03-21 10:22:36
可能酶切条件不合适，温度不适宜是一个原因

pstI HindIII 37° buffer R 应该没问题吧？
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3楼2014-03-21 12:30:58
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西门吹雪170

荣誉版主 (职业作家)
引用回帖:
3楼: Originally posted by JICK159 at 2014-03-21 12:30:58
pstI HindIII 37° buffer R 应该没问题吧？...

你确定你水浴锅的温度一定是37吗？其次看看是否要改变一下体系各成分的量，建议而已哈
赞一下(1人) 回复此楼
植根于内心的修养；无需提醒的自觉；以约束为前提的自由；为别人着想的善良
4楼2014-03-21 13:40:08
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