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我听五月天

木虫 (正式写手)

[求助] 【回复此贴,版主奖励加倍】双波长法测定MTT结果和颜色明显不成正比怎么办? 已有1人参与

小弟用MTT测定药物对细胞抑制率,酶标仪双波长用的是492和630,结果两个波长下的差值跟颜色明显不成正比,这是什么原因?
我具体操作是这样的-做了12个不加药的对照孔,想看DMSO溶解前用PBS清晰孔和不清洗的区别,八个孔清洗了一次,四个孔没有清洗,结果没有清洗的颜色明显比清洗过的要深,在492纳米处吸收跟颜色成正比,而两波长下的差值跟颜色不成正比。每孔加入DMSO之后,任意取一个清洗过的孔中的溶液出来,来用紫外测到最大吸收在502纳米处。
这样是不是说明我以后应该用酶标仪单波长492纳米处测96孔板的MTT?

[ Last edited by silicare on 2014-3-21 at 08:13 ]
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为爱而生
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我听五月天

木虫 (正式写手)

自己顶一下吧,置顶两天都没人回复?
为爱而生
2楼2014-03-23 15:07:31
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我听五月天

木虫 (正式写手)

再顶一次。顺便说一下自己的解决方法--下次测吸光,把492纳米和双波长的差值都记下来,然后用紫外测甲瓚溶液,看哪个更能反映事实顺便问问大家,有没有用双波长的?可以讨论一下,至今不知道双波长的原理~~大家测MTT用的单波长是哪个?
为爱而生
3楼2014-03-27 21:55:26
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司徒程落

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

贴壁细胞我用的570nm测定,630nm参比波长。悬浮细胞不用参比波长。
结果平行度还好。
4楼2015-04-21 17:06:55
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