| 查看: 713 | 回复: 8 | |||
| 当前主题已经存档。 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
[交流]
求助！！NI亲和层析纯化
|
|||
|
我做的是外源蛋白的原核表达与纯化。 使用的表达载体是pET32，融合蛋白：融合Trx，带有6*His标签，设计有肠激酶酶切位点。简式：Trx--6*His--肠激酶位点--目的蛋白。 蛋白表达后，先用NI亲和层析树脂吸附融合蛋白，用50mM、100mM、150mM咪唑缓冲液洗脱蛋白，收集融合蛋白。透析出去缓冲液，用肠激酶酶切，生成Trx--6*His--肠激酶位点和目的蛋白。然后再次用NI亲和层析树脂吸附Trx--6*His--肠激酶位点,留下目的蛋白。将目的蛋白冷冻干燥浓缩，SDS-PAGE检测。 检测发现，收集的融合蛋白主要在50mM、100mM咪唑缓冲液时洗出，以融合蛋白为主，但是存在少量杂蛋白，因为以后蛋白要用于药用，老板要求纯度要高，怎么除去？ 更主要的是第二次亲和层析后收集到的目的蛋白，经过冷冻干燥后，存在大量杂蛋白，目的蛋白含量还达不到50%。我的目的蛋白分子量4200D，不太容易分离纯化，不知道大家有没有好的有效的方法，至少也要把目的蛋白弄到电泳纯吧！！ 谢谢各位高手！！ |
回复此楼» 猜你喜欢
309求调剂
已经有8人回复
-
一志愿南航 335分 | 0856 | GPA 4.07 | 有科研经历
已经有8人回复
-
求调剂
已经有5人回复
-
求化学调剂
已经有5人回复
-
085600，材料与化工321分求调剂
已经有10人回复
-
0703 化学 求调剂，一志愿山东大学 342 分
已经有5人回复
-
一志愿南开大学0710生物学359求调剂
已经有3人回复
-
085600，专业课化工原理，320分求调剂
已经有4人回复
-
材料与化工272求调剂
已经有16人回复
-
290求调剂
已经有3人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
lxj341401
至尊木虫 (著名写手)
- BioEPI: 1
- 应助: 388 (硕士)
- 贵宾: 0.238
- 金币: 17138.7
- 红花: 43
- 帖子: 2251
- 在线: 712.4小时
- 虫号: 111074
- 注册: 2005-11-20
- 专业: 生物化学
4楼2008-02-20 10:54:40
2楼2008-02-19 20:58:09
3楼2008-02-20 07:52:42
5楼2008-02-26 14:06:19
