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郁灵子

金虫 (初入文坛)

[求助] 大质粒纯化浓缩应该用什么方法啊? 已有2人参与

我的是提取好的质粒,用dd水溶的,想纯化浓缩一下,在网上看到的方法是:
质粒用等体积的酚/氯仿抽提一次,重复此步骤,加入两倍体积的无水乙醇和1/10体积的3 mol/L乙酸钠溶液后混匀,零下20摄氏度沉淀30 min后12000 r/min离心10 min,沉淀用75%乙醇洗涤一次,12000 r/min离心5 min,弃上清,沉淀自然干燥后溶于20~40微升去离子水中或者0.5 mol/L pH8.0的TE中。
可是从一加入两倍体积无水乙醇开始,就出现了雪花状或者雾状沉淀,根本不像DNA啊,蛋白也不像,硬着头皮按步骤做完,最后用水溶,可是,溶不了了,连电泳都没心情跑了,这是咋回事啊?
除了这个方法,还有什么好的方法能纯化浓缩大质粒的么?
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liuderong

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

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郁灵子(gyesang代发): 金币+2, 鼓励回帖交流! 2014-03-31 18:05:29
还是先跑个电泳看看效果吧,说不定白色的是蛋白之类的污染物。
2楼2014-03-12 13:23:43
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lvbobo823

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

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郁灵子(gyesang代发): 金币+2, 鼓励回帖交流! 2014-03-31 18:05:35
大提的样品容易出现这种现象,你可以用冷冻干燥离心机浓缩一下。
hehe
3楼2014-03-12 21:26:43
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