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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 新药研发 » 资料求助 » 透射电镜~观察脂质纳米粒~应如何制样？？？
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xxyscs7866

金虫 (小有名气)

[求助] 透射电镜~观察脂质纳米粒~应如何制样？？？已有1人参与

各位大神好，在下做实验的时候遇到了如题的问题

具体过程是这样的……

本人做的是纳米粒包载药物的一个载体，由有机的油脂、药物和离子修饰过的有机材料构成。制备好后测粒径几个样品分别是20nm到120nm左右，委托某某大学测粒径找了一个小时发现完全没办法找到我说的粒径范围内的微粒，或者说视野内根本看不到球！！各位有什么高见吗？？？我只是想找到看到就可以了…………


我自己怀疑有几种可能，
1支架不合适，我查文献脂质纳米粒做TEM用的都是铜网，可是我们这边貌似没有铜网，人家制样的老师看我没要求就随手给我用了个什么纤维神马的膜，后来还说要不你就用超薄碳膜吧，大神们觉得哪个能做出来？？？因为老师说这次的可能从纤维缝隙漏下去了   各位觉得是这个原因吗？？
2染色剂    受委托方给我们用的是乙醇配制的磷钨酸，磷钨酸本身貌似没什么问题，我看文献上都用这个，但是我的脂质材料是醇溶的，我想会不会是在制样的过程中出现了破乳？微粒直接溶完了啊？？   各位觉得是这种原因吗？
3我也猜不出来是什么原因了…………各位做脂质纳米粒一般都怎么具体操作的啊？？？求教求救！！！

                                         跪谢…………
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1楼2014-03-10 16:08:50
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xxyscs7866

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 33088605 at 2014-03-10 19:06:35
你说的三点都太想当然了，需要的话，我发下我拍的照片给你看看。
为什么不自己拍呢，自己的东西只有自己才是最了解的。
1.TEM用的都是铜网， 铜网上附着了碳纤维膜，膜在电镜中由于电子束过强会破裂的，但可以很清 ...

您好    非常感谢您的指点   
昨天我们的TEM已经顺利找到了拍了图片   但是实事证明我们去测试的地方的制样老师技术非常成问题    所以我想自己学做

不知道您那儿有没有关于制样方法（尤其包括染色方法，染色剂配制）的文件可以参考？？？

谢谢！！
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5楼2014-04-22 10:50:15
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33088605

铁虫 (正式写手)

general

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
xxyscs7866: 金币+5, ★★★很有帮助, 非常感谢您的回答 我的是在别的学校做的 所以制样老师制的时候比较随意 后来我才发现还有这么多问题 慢慢学习吧 谢谢你 2014-04-15 12:23:11
你说的三点都太想当然了，需要的话，我发下我拍的照片给你看看。
为什么不自己拍呢，自己的东西只有自己才是最了解的。
1.TEM用的都是铜网， 铜网上附着了碳纤维膜，膜在电镜中由于电子束过强会破裂的，但可以很清晰地看到，及时破了，粒子绝不会漏下去的（你们的老师太水了），而且即使膜破了也是没问题的，很常见，应为一张铜网上有非常多的这样的单元，破了几个一点问题没有。
2，负染的磷钨酸为什么要用醇作溶剂？！这对铜网上的碳膜好嘛，对纳米粒子也是非常不好的，用通常文献上报到的浓度就可以，具体浓度现在记不清，找不到得会在QQ我，我ID就是我QQ号，记得最好过后调ph至中性。
3.你样品的浓度控制好了没？浓度太高太低都不好，脂质纳米粒一般浓度在0.1mg/m-0.5mg/ml比较好。
4.样品制备是否正确：样品稀释至适当浓度--滴加到铜网上--晾干（避免强光，高温）--负染---晾干--检测。（切记不要将铜网在样品里蘸下，过后再在染色剂里蘸下）；
5：找区域的时候一定要细心，黑白交接的地方，淡淡的灰色的地方最有可能，有机粒子不想无机粒子或金属粒子，比较难拍的
6，找到了比较好的区域后记得用不同的倍率多拍几张，而且要将那个（bar）的位置以及那个单位调整好，要不然后面用图片的时候会后悔的。
7：最后的忠告：1）你的东西绝对是能拍出来的，2）tem不像sem那样好拍，尤其是有机粒子，更难拍，要多拍拍，过后你想拍不出来都难。
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伟大的人不需要个人签名
2楼2014-03-10 19:06:35
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33088605

铁虫 (正式写手)

general

【答案】应助回帖

忘记说了，铜网可以自己在网上买，大概5块钱一张，买了找老板报销
赞一下(1人) 回复此楼

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xxyscs7866
伟大的人不需要个人签名
3楼2014-03-10 19:14:14
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jjf139

金虫 (著名写手)

新药研发&药物分析
实在不行，打电话问电镜应用工程师
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4楼2014-03-16 20:42:34
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