24小时热门版块排行榜    

查看: 3587  |  回复: 5

weiyuanzheng

铜虫 (小有名气)


[交流] 带T7启动子的体外转录效率

各位老师,各位师兄师姐,最近我一直在做体外转录,用的是life 的mMESSAGE mMACHINE® Kit体外转录试剂盒,但是转录的RNA量很低,大概只有50ng/ul的样子,纯度可以。我做了阳性对照,提高了转录模版浓度,但是结果还是不理想。同时我又把转录模版拿去测序,发现T7启动子区域完全正确!!5‘端设置了3个保护碱基,应该说没问题的,急盼各位亲们多多指导,谢谢啦。
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

仙人掌的龟

新虫 (初入文坛)


我也有这个问题!请问您在37度放置两小时后,可以在EP 管中看到白色的沉淀物吗?
2楼2014-03-15 02:24:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

weiyuanzheng

铜虫 (小有名气)


引用回帖:
2楼: Originally posted by 仙人掌的龟 at 2014-03-15 02:24:05
我也有这个问题!请问您在37度放置两小时后,可以在EP 管中看到白色的沉淀物吗?

看不到呀,嘿嘿,不过还好吧,可能是转录效率的问题,我的已经解决了,你也加油哦,祝实验顺利!
3楼2014-03-15 15:53:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
引用回帖:
2楼: Originally posted by 仙人掌的龟 at 2014-03-15 02:24:05
我也有这个问题!请问您在37度放置两小时后,可以在EP 管中看到白色的沉淀物吗?

这个经常能够看见,尤其是使用PCR为模板的时候,质粒为模板见到的概率较低。我的理解可能是两个方面的原因,如果是一层紧贴EP管下端的白色沉淀,感觉很致密的,应该是DNA模板沉淀了,因为转录体系中有精胺,这个东西可以导致DNA沉淀。如果是整体的浑浊,可能是转录出来的RNA含量很丰富。但是不管如何,这一点并不影响转录的效率。
4楼2014-03-17 17:16:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

呼锐

金虫 (小有名气)


引用回帖:
3楼: Originally posted by weiyuanzheng at 2014-03-15 15:53:15
看不到呀,嘿嘿,不过还好吧,可能是转录效率的问题,我的已经解决了,你也加油哦,祝实验顺利!...

具体怎么做的 学习一下呗
5楼2014-04-08 13:28:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hrjailjg

新虫 (初入文坛)


请问您质粒模板切多少ug
6楼2014-11-23 02:46:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 weiyuanzheng 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 售SCI-T0P文章,我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 E4V9bALS54sj 2026-09-19 4/200 2026-09-20 07:24 by 9i7PCSZyMzot
[硕博家园] 售SCI文章,我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 E4V9bALS54sj 2026-09-19 4/200 2026-09-20 07:12 by 9i7PCSZyMzot
[博后之家] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 E4V9bALS54sj 2026-09-19 4/200 2026-09-20 07:12 by 9i7PCSZyMzot
[公派出国] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 E4V9bALS54sj 2026-09-19 4/200 2026-09-20 07:06 by 9i7PCSZyMzot
[考博] 售SCI文章,我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 E4V9bALS54sj 2026-09-19 4/200 2026-09-20 07:01 by 9i7PCSZyMzot
[基金申请] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 E4V9bALS54sj 2026-09-19 4/200 2026-09-20 07:01 by 9i7PCSZyMzot
[论文投稿] 售SCI文章,我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 E4V9bALS54sj 2026-09-19 4/200 2026-09-20 06:55 by 9i7PCSZyMzot
[考研] 售SCI一区文章,我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 4pRyVGCVerAA 2026-09-19 3/150 2026-09-20 00:15 by 9i7PCSZyMzot
[硕博家园] 售SCI-T0P文章,我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 4pRyVGCVerAA 2026-09-19 3/150 2026-09-20 00:03 by 9i7PCSZyMzot
[找工作] 售SCI一区T0P文章,我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +4 4pRyVGCVerAA 2026-09-19 4/200 2026-09-20 00:03 by 9i7PCSZyMzot
[考博] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 4pRyVGCVerAA 2026-09-19 4/200 2026-09-19 23:51 by 9i7PCSZyMzot
[基金申请] 售SCI一区T0P文章,我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 4pRyVGCVerAA 2026-09-19 4/200 2026-09-19 23:39 by 9i7PCSZyMzot
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 4pRyVGCVerAA 2026-09-19 4/200 2026-09-19 23:27 by 9i7PCSZyMzot
[考研] 售SCI一区T0P文章,我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 4pRyVGCVerAA 2026-09-19 4/200 2026-09-19 23:27 by 9i7PCSZyMzot
[公派出国] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 4pRyVGCVerAA 2026-09-19 4/200 2026-09-19 23:03 by 9i7PCSZyMzot
[考博] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 4pRyVGCVerAA 2026-09-19 4/200 2026-09-19 23:03 by 9i7PCSZyMzot
[公派出国] 售SCI文章,我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 4pRyVGCVerAA 2026-09-18 7/350 2026-09-19 21:03 by 9i7PCSZyMzot
[有机交流] 各位大神,目前国内有哪些比较好用的逆合成软件? 20+3 zapen 2026-09-15 9/450 2026-09-18 18:17 by zapen
[考博] 上海工程技术大学激光智能制造课题组|2027级博士研究生招生公告 +7 水士口 2026-09-16 8/400 2026-09-16 13:47 by kkklens
[考博] 上海工程技术大学激光智能制造课题组招收博士研究生 +8 两三岁ss 2026-09-14 8/400 2026-09-16 09:46 by 水士口
信息提示
请填处理意见