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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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weiyuanzheng

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[交流] 带T7启动子的体外转录效率

各位老师,各位师兄师姐,最近我一直在做体外转录,用的是life 的mMESSAGE mMACHINE® Kit体外转录试剂盒,但是转录的RNA量很低,大概只有50ng/ul的样子,纯度可以。我做了阳性对照,提高了转录模版浓度,但是结果还是不理想。同时我又把转录模版拿去测序,发现T7启动子区域完全正确!!5‘端设置了3个保护碱基,应该说没问题的,急盼各位亲们多多指导,谢谢啦。
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仙人掌的龟

版主

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我也有这个问题!请问您在37度放置两小时后,可以在EP 管中看到白色的沉淀物吗?
2楼2014-03-15 02:24:05
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weiyuanzheng

超级版主

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引用回帖:
2楼: Originally posted by 仙人掌的龟 at 2014-03-15 02:24:05
我也有这个问题!请问您在37度放置两小时后,可以在EP 管中看到白色的沉淀物吗?

看不到呀,嘿嘿,不过还好吧,可能是转录效率的问题,我的已经解决了,你也加油哦,祝实验顺利!
3楼2014-03-15 15:53:15
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引用回帖:
2楼: Originally posted by 仙人掌的龟 at 2014-03-15 02:24:05
我也有这个问题!请问您在37度放置两小时后,可以在EP 管中看到白色的沉淀物吗?

这个经常能够看见,尤其是使用PCR为模板的时候,质粒为模板见到的概率较低。我的理解可能是两个方面的原因,如果是一层紧贴EP管下端的白色沉淀,感觉很致密的,应该是DNA模板沉淀了,因为转录体系中有精胺,这个东西可以导致DNA沉淀。如果是整体的浑浊,可能是转录出来的RNA含量很丰富。但是不管如何,这一点并不影响转录的效率。
4楼2014-03-17 17:16:33
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呼锐

超级版主

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!


引用回帖:
3楼: Originally posted by weiyuanzheng at 2014-03-15 15:53:15
看不到呀,嘿嘿,不过还好吧,可能是转录效率的问题,我的已经解决了,你也加油哦,祝实验顺利!...

具体怎么做的 学习一下呗
5楼2014-04-08 13:28:55
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hrjailjg

专家顾问

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请问您质粒模板切多少ug
6楼2014-11-23 02:46:03
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