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icenoreen

铜虫 (初入文坛)

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专业: 生物医用高分子材料

[求助] Transwell迁移实验MSC细胞一个都迁移不下去T^T

急求做过transwell细胞迁移实验的前辈们赐教。

我用的是Corning#3422的8微米聚碳酸酯膜的24孔板，细胞是小鼠骨髓间充质干细胞（因为是预实验，所以用的不是现提的，是以前提了用剩下冻存的，用作迁移实验的应该能在5代以内，形态看起来也挺好的），因为以前没做过细胞迁移实验，所以不敢直接用要测的蛋白，先用含不同百分数血清（分别用了0.1%，1%，5%，10%的血清）的培基来做的预实验。做了两次，每次用棉签擦掉上室细胞以后染色就一个细胞也看不到了><，我试过一次一个平行孔不用棉签擦的，染色的时候就能染出很多上室的细胞，说明细胞完全没有迁移到下室。

延长了迁移时间（24h和48h都做了），还是迁移不下去，一个细胞都没迁移到下室...

按理说10%的血清应该很明显能发生迁移吧（不会是血清过低），所有看到的文献上做MSC迁移用的也都是8微米的孔（也不会是孔太小）。
我也按照操作步骤经过了24h饥饿处理的，上室细胞悬液用的是无血清培基（加了0.1%BSA保持渗透压）。
用棉签擦的操作我也在网上问过，别人告诉我这个操作应该没什么问题的……

可是就是想不出为什么一个细胞也没迁移下去><。我们组就我一个人做迁移实验，其他人都没做过，我也是第一次做在摸索，所以很无助，实验没法继续做下去了...

诚恳地请教做过的前辈出来传授一下经验，这个问题有可能是什么原因造成的？应该怎么解决？

非常感谢！

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