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alman001铜虫 (小有名气)
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[求助]
农作物转基因植株检测遇到问题
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本人做转基因沉默植株检测，由于转的基因为植物内源基因，所以设计的pcr检测引物为沉默载体上的序列（35s的一部分+bar基因的一部分，没有所转基因的特异性序列，沉默载体为pFGC5941），在检测的时候遇到了问题： 第一次，我用的是全式金的EASYtaq酶，从本作物的两个野生型品种中没有扩增到条带，拟转基因株系中有的能扩增出来目的条带，有的没有（而且从每个基因构建好的载体上也能很好地扩增出目的条带，说明引物设计得应该没有问题），当时我觉得结果比较满意。 第二次，为了验证这对检测引物好用，我又用Takara的rTaq酶对同样的野生型和拟转基因株系进行了检测，pcr条件和第一次一样，结果几乎得到的拟转基因株系都能扩出相应的目的条带，更奇葩的是，从两个本作物的野生型品种中也扩增到了相同的目的条带，我就很郁闷。 而且之前我也根据同样的沉默载体设计过检测引物（至少有一条正向或反向引物为植物不含有的35s或bar序列），也经常能在野生型中扩增出目的条带，相当郁闷。 论坛里有木有同道做过这个载体的转基因植株检测，大家帮我分析一下什么原因啊，谢啦！ |
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