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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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alman001

铜虫 (小有名气)

[求助] 农作物转基因植株检测遇到问题

本人做转基因沉默植株检测,由于转的基因为植物内源基因,所以设计的pcr检测引物为沉默载体上的序列(35s的一部分+bar基因的一部分,没有所转基因的特异性序列,沉默载体为pFGC5941),在检测的时候遇到了问题:
    第一次,我用的是全式金的EASYtaq酶,从本作物的两个野生型品种中没有扩增到条带,拟转基因株系中有的能扩增出来目的条带,有的没有(而且从每个基因构建好的载体上也能很好地扩增出目的条带,说明引物设计得应该没有问题),当时我觉得结果比较满意。
    第二次,为了验证这对检测引物好用,我又用Takara的rTaq酶对同样的野生型和拟转基因株系进行了检测,pcr条件和第一次一样,结果几乎得到的拟转基因株系都能扩出相应的目的条带,更奇葩的是,从两个本作物的野生型品种中也扩增到了相同的目的条带,我就很郁闷。
    而且之前我也根据同样的沉默载体设计过检测引物(至少有一条正向或反向引物为植物不含有的35s或bar序列),也经常能在野生型中扩增出目的条带,相当郁闷。
   

    论坛里有木有同道做过这个载体的转基因植株检测,大家帮我分析一下什么原因啊,谢啦!
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有事做,无事争
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bired

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

回收pcr产物,测序,比对。还有就是pcr污染问题。
2楼2014-03-15 15:25:47
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wangrh

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

请问这个问题你解决了吗,我也是这个问题
3楼2017-08-31 15:11:23
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jeff005

新虫 (初入文坛)

我的理解是,可以考虑污染,但是对于沉默而言,你做pcr扩增只能说明它是不是转基因的,究竟是不是起到沉默的效果,还得看转录水平和翻译水平吧

发自小木虫IOS客户端
4楼2017-09-14 13:44:54
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