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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 重复性
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陈阳阳

铜虫 (小有名气)

[求助] 重复性 已有5人参与

近期做了很多PCR，是完全一样的反应体系，完全一样的PCR程序，胶浓度各种都一样，只是重复做。但是有的条带这次做有另外一次就没有，结果重复不出来，百思不得其解，为什么啊？郁闷死了:
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1楼 2014-02-27 11:36:54
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西门吹雪170

荣誉版主 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-02-27 18:26:42
我以前也遇到过这样的情况，PCR就是死活也做不出来，偶尔运气好的话会出来。不知是不是楼主的PCR操作技能存在着一定的不足，建议你等除酶以外的试剂先融化后再加入反应体系。如果不是这个操作问题的话，可以改变PCR程序，改变一下退火温度试试，祝试验成功
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植根于内心的修养；无需提醒的自觉；以约束为前提的自由；为别人着想的善良
2楼2014-02-27 12:54:50
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atlanticwi

金虫 (正式写手)

琴美喜欢发呆 不喜欢发脾气
★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-02-27 18:26:52
....
    怎么说吧，记得有人评论过，PCR并不是一个精确的工具，原因就在于其具有太多不确定性。
    个人认为，在重复性上，酶是很关键的
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Let God do with it as He wills
3楼2014-02-27 12:58:51
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yuren2009

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-02-27 18:27:00
模版DNA有没有问题？外部因素很多，操作没问题就从最初考虑，步步排除。
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学习使你立于不败之地
4楼2014-02-27 13:08:01
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陈阳阳

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 西门吹雪170 at 2014-02-27 12:54:50
我以前也遇到过这样的情况，PCR就是死活也做不出来，偶尔运气好的话会出来。不知是不是楼主的PCR操作技能存在着一定的不足，建议你等除酶以外的试剂先融化后再加入反应体系。如果不是这个操作问题的话，可以改变PCR ...

应该是操作技能吧。PCR程序每次都是一模一样的。用的是master mix,
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5楼2014-02-27 18:14:20
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陈阳阳

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by yuren2009 at 2014-02-27 13:08:01
模版DNA有没有问题？外部因素很多，操作没问题就从最初考虑，步步排除。

模板应该没有问题，每次都是同样的模板。还是操作问题。但是感觉操作每次都是一样的没有什么区别，想不出来到底是哪一步出了问题。
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6楼2014-02-27 18:16:20
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西门吹雪170

荣誉版主 (职业作家)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 陈阳阳 at 2014-02-27 18:14:20
应该是操作技能吧。PCR程序每次都是一模一样的。用的是master mix,...

那就请向你的导师啊，师兄师姐请教吧
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植根于内心的修养；无需提醒的自觉；以约束为前提的自由；为别人着想的善良
7楼2014-02-27 19:31:30
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三蛰

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
其实有的Taq酶，需要化冻后混匀用。再就是一些操作过程中注意混合液的混匀等等，很多细节都得注意。
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我不会！
8楼2014-02-27 19:34:42
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forrestgump

新虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖交流！ 2014-03-30 17:11:29
兄弟，很正常的现象，当您的引物不是优势扩增，就会出现你这种现象。
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9楼2014-02-28 00:11:07
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lvbobo823

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
正常，有时PCR就这样重复性不好。你多做几次，也许就出来了。
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hehe
10楼2014-02-28 08:13:39
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