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陈阳阳

铜虫 (小有名气)

[求助] 重复性 已有5人参与

近期做了很多PCR,是完全一样的反应体系,完全一样的PCR程序,胶浓度各种都一样,只是重复做。但是有的条带这次做有另外一次就没有,结果重复不出来,百思不得其解,为什么啊?郁闷死了:
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西门吹雪170

荣誉版主 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2014-02-27 18:26:42
我以前也遇到过这样的情况,PCR就是死活也做不出来,偶尔运气好的话会出来。不知是不是楼主的PCR操作技能存在着一定的不足,建议你等除酶以外的试剂先融化后再加入反应体系。如果不是这个操作问题的话,可以改变PCR程序,改变一下退火温度试试,祝试验成功
植根于内心的修养;无需提醒的自觉;以约束为前提的自由;为别人着想的善良
2楼2014-02-27 12:54:50
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atlanticwi

金虫 (正式写手)

琴美喜欢发呆 不喜欢发脾气

★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2014-02-27 18:26:52
....
    怎么说吧,记得有人评论过,PCR并不是一个精确的工具,原因就在于其具有太多不确定性。
    个人认为,在重复性上,酶是很关键的
Let God do with it as He wills
3楼2014-02-27 12:58:51
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yuren2009

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2014-02-27 18:27:00
模版DNA有没有问题?外部因素很多,操作没问题就从最初考虑,步步排除。
学习使你立于不败之地
4楼2014-02-27 13:08:01
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陈阳阳

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 西门吹雪170 at 2014-02-27 12:54:50
我以前也遇到过这样的情况,PCR就是死活也做不出来,偶尔运气好的话会出来。不知是不是楼主的PCR操作技能存在着一定的不足,建议你等除酶以外的试剂先融化后再加入反应体系。如果不是这个操作问题的话,可以改变PCR ...

应该是操作技能吧。PCR程序每次都是一模一样的。用的是master mix,
5楼2014-02-27 18:14:20
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陈阳阳

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by yuren2009 at 2014-02-27 13:08:01
模版DNA有没有问题?外部因素很多,操作没问题就从最初考虑,步步排除。

模板应该没有问题,每次都是同样的模板。还是操作问题。但是感觉操作每次都是一样的没有什么区别,想不出来到底是哪一步出了问题。
6楼2014-02-27 18:16:20
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西门吹雪170

荣誉版主 (职业作家)

引用回帖:
5楼: Originally posted by 陈阳阳 at 2014-02-27 18:14:20
应该是操作技能吧。PCR程序每次都是一模一样的。用的是master mix,...

那就请向你的导师啊,师兄师姐请教吧
植根于内心的修养;无需提醒的自觉;以约束为前提的自由;为别人着想的善良
7楼2014-02-27 19:31:30
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三蛰

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
其实有的Taq酶,需要化冻后混匀用。再就是一些操作过程中注意混合液的混匀等等,很多细节都得注意。
我不会!
8楼2014-02-27 19:34:42
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forrestgump

新虫 (著名写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖交流! 2014-03-30 17:11:29
兄弟,很正常的现象,当您的引物不是优势扩增,就会出现你这种现象。
9楼2014-02-28 00:11:07
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lvbobo823

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
正常,有时PCR就这样重复性不好。你多做几次,也许就出来了。
hehe
10楼2014-02-28 08:13:39
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