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[求助]
离子色谱，新手，准备摸索植酸的测定，不懂，求解，谢谢各位
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0.5 g each of the legume samples powder were extracted under mechanical agitation with 20 ml 0.5 M HCl for 2 h at room temperature (Graf & Dintzis, 1982). The extract was centrifuged (700 g, 10 min) and the supematant decanted, frozen overnight, centrifuged and filtered through MF-Millipore (0.22 pm). The inositol phosphates were separated from the filtrate and concentrated by the ion-exchange procedure of Sandberg and Ahderinne (1986) with some modifications. The filtrate was evaporated to dryness under vacuum (35℃, dissolved in 15 ml, 25 mM HCI, and passed through a strong anion-exchange (SAX) column that was connected to a vacuum manifold (Visiprep; Supelco, Bellefonte, PA, USA). The loaded SAX column was washed successively with 10 and 5 ml of 25 mM HCI. The resin-bound inositol polyphosphates (IP3, IP4, IP5 and IP6) were then eluted with ten 1 ml portions of 2 M HCl. The eluent was evaporated to dryness and diluted with 0.5 ml of mobile phase. 自己大致翻译了下，求助各位大神，该段话有很多不理解的， 取0.5g上述粉末用20ml的0.5M的盐酸室温下机械搅拌浸提2h (Graf & Dintzis, 1982)，离心700g×10min后取上清，冷冻过夜，并过0.22μ滤膜(MF-Millipore)，肌醇磷酸盐通过滤膜过滤至滤液中，并经过Sandberg and Ahderinne (1986)改进的离子交换过程进行浓缩。滤液在抽真空后35摄氏度干燥(真空干燥器 35℃)然后用15ml浓度为25mM盐酸将其溶解，上强阴离子交换柱(季铵键合)，该强阴离子交换柱与真空歧管装置上相连，依次用10m 25mM盐酸 和5m l25mM盐酸洗脱，与树脂结合的肌醇磷酸(IP3，IP4，IP5和IP6)被ten 个1ml 部分2M的盐酸洗脱 有几个地方不是很明白，特求助大牛们给点自己的看法 1、上面说0.5g的粉末在0.5M的盐酸中机械搅拌，用磁力搅拌是否可以？ 2、离心取上清后冷冻过夜的目的是什么？ 3、该强阴离子交换柱与真空歧管装置上相连，想问下实验室没有真空歧管装置怎么办？该装置的作用是什么？可否用其他代替？ 4、后面说用25mM盐酸连续洗脱，我想问下为什么写成The loaded SAX column was washed successively with 10 and 5 ml of 25 mM HCI，是先拿10ml洗再拿5ml洗吗？为什么要这么做，洗的时候是10ml全部加进去之后再将5ml全部加进去吗？ 5、还有最最最不理解的后面的一句，The resin-bound inositol polyphosphates (IP3, IP4, IP5 and IP6) were then eluted with ten 1 ml portions of 2 M HCl，说是与树脂结合的肌醇多磷酸被 ten 1 ml portions of 2M盐酸洗脱，这个是第10个1ml吗？是什么意思？是加10次吗？每次加1ml，然后收集加第10个1ml时候的洗脱液？那是收集1ml吗？真心不懂，希望大牛能帮帮忙~~谢谢！！！ |
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