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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物信息 » Gibson assembly 组装大家一般用几个片段组装？
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fenggou82

金虫 (正式写手)

[交流] Gibson assembly 组装大家一般用几个片段组装？ 已有8人参与

Gibson assembly 组装大家一般用几个片段组装？
最近使用了5个片段，感觉效率挺低的，并且筛选出正确的克隆也是一个费力的活。
大家有什么样的经验可以分享一下。
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lovemyfamilyforever
1楼 2014-02-25 15:43:23
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nicknelson

至尊木虫 (职业作家)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
请问Gibson Assembly 一定要用蓝白筛选吗？可不可以不用蓝白筛选，直接挑克隆进行PCR筛选？这样效率能有多高？
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7楼2014-07-25 10:40:19
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fenggou82

金虫 (正式写手)
谢谢帮忙，不过里面没有自己需要的信息。
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lovemyfamilyforever
2楼2014-02-25 15:55:54
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xingyu1103

金虫 (初入文坛)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2014-02-26 21:02:26
三个片段效率还是很高的，四个就偏低了
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3楼2014-02-26 15:08:32
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yugari_nagi

铁虫 (初入文坛)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-03-30 17:01:41
一般做3片段，成功率不错，5片段也能做出来

片段浓度尽量高 反应体积不要太大 各片段摩尔比1：1
我们实验室做的一般片段的总体积控制在5ul以内，再加15ul enzyme mix
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更恋秋风
4楼2014-02-27 16:49:15
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