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fenggou82

金虫 (正式写手)

[交流] Gibson assembly 组装大家一般用几个片段组装? 已有8人参与

Gibson assembly 组装大家一般用几个片段组装?
最近使用了5个片段,感觉效率挺低的,并且筛选出正确的克隆也是一个费力的活。
大家有什么样的经验可以分享一下。
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lovemyfamilyforever
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yugari_nagi

铁虫 (初入文坛)

★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2014-03-30 17:01:41
一般做3片段,成功率不错,5片段也能做出来

片段浓度尽量高 反应体积不要太大 各片段摩尔比1:1
我们实验室做的一般片段的总体积控制在5ul以内,再加15ul enzyme mix

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4楼2014-02-27 16:49:15
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fenggou82

金虫 (正式写手)

谢谢帮忙,不过里面没有自己需要的信息。
lovemyfamilyforever
2楼2014-02-25 15:55:54
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xingyu1103

金虫 (初入文坛)

★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2014-02-26 21:02:26
三个片段效率还是很高的,四个就偏低了
3楼2014-02-26 15:08:32
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三蛰

铜虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
我有一份绝密资料
我不会!
5楼2014-02-28 22:55:19
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xixi_pds7

银虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
4楼: Originally posted by yugari_nagi at 2014-02-27 16:49:15
一般做3片段,成功率不错,5片段也能做出来

片段浓度尽量高 反应体积不要太大 各片段摩尔比1:1
我们实验室做的一般片段的总体积控制在5ul以内,再加15ul enzyme mix

可不可以交流一下,我也是用5ul的fragments,加上15ul的pre-mix,可是一直连不上啊,还是说我的后期筛选方式不对
6楼2014-05-29 08:27:00
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nicknelson

至尊木虫 (职业作家)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
请问Gibson Assembly 一定要用蓝白筛选吗?可不可以不用蓝白筛选,直接挑克隆进行PCR筛选?这样效率能有多高?
7楼2014-07-25 10:40:19
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13345129835

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
5楼: Originally posted by 三蛰 at 2014-02-28 22:55:19
我有一份绝密资料

分享一下呗
8楼2016-01-04 16:58:11
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更恋秋风

铁杆木虫 (小有名气)


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送红花一朵
引用回帖:
4楼: Originally posted by yugari_nagi at 2014-02-27 16:49:15
一般做3片段,成功率不错,5片段也能做出来

片段浓度尽量高 反应体积不要太大 各片段摩尔比1:1
我们实验室做的一般片段的总体积控制在5ul以内,再加15ul enzyme mix

楼主,你好。请问你们的mix里面包含buffer么?5ul+15ul mix,buffer是另外加的么?我最近老是做不出来,就是用的5ul片段加的5ul mix,一直做不出来呀
9楼2016-02-26 14:42:55
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更恋秋风

铁杆木虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
4楼: Originally posted by yugari_nagi at 2014-02-27 16:49:15
一般做3片段,成功率不错,5片段也能做出来

片段浓度尽量高 反应体积不要太大 各片段摩尔比1:1
我们实验室做的一般片段的总体积控制在5ul以内,再加15ul enzyme mix

多余的是不是补得水呀
10楼2016-02-26 14:49:38
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