| 查看: 1235 | 回复: 9 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
[求助]
质粒提取 已有1人参与
|
||
| 本人刚开始做基因实验 提取了菌体的质粒跑了电泳之后有三条带，经过了解是DNA的三种形态，是正常的。 但是我还有个疑问，就是如果之后我要用质粒酶切和连接，提取是呈线性状态的质粒不就没用了吗，会被切成两段的?质粒的这三种形态在之后的实验中都能用上吗，还是怎样,求大神指教 |
回复此楼» 猜你喜欢
化工申博
已经有3人回复
-
申博自荐
已经有3人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有269人回复
-
广西民族大学化学化工学院化学工程与技术学硕，材料化工专硕调剂名额充足！
已经有0人回复
-
透明质酸酶的作用机制：如何实现药物递送
已经有0人回复
-
爱思维尔旗下LWT投稿
已经有9人回复
-
替拉扎明为缺氧选择性细胞毒药物研究提供新思路
已经有0人回复
-
拉坦前列腺素(Latanoprost)：前列腺素F2α衍生物如何成为青光眼一线用药
已经有0人回复
-
卟啉家族中的明星分子：MESO-四(3,5-二溴-4-羟基苯基)卟啉的性质与制备
已经有1人回复
-
宠物寄生虫防治：氟雷拉纳阻断GABA受体，持效12周驱杀跳蚤蜱虫
已经有0人回复
-
为呼吸打开通道：依伐卡托的科学之旅
已经有0人回复
西门吹雪170
荣誉版主 (职业作家)
- MolEPI: 1
- 应助: 92 (初中生)
- 贵宾: 0.982
- 金币: 27278.4
- 散金: 1072
- 红花: 40
- 沙发: 2
- 帖子: 3092
- 在线: 438.7小时
- 虫号: 1209807
- 注册: 2011-02-22
- 性别: MM
- 专业: 认知科学
- 管辖: 分子生物
6楼2014-02-18 13:34:47
huangrui1988 
铜虫 (小有名气)
- 应助: 73 (初中生)
- 金币: 1727.8
- 散金: 20
- 红花: 2
- 帖子: 201
- 在线: 210.1小时
- 虫号: 953497
- 注册: 2010-02-07
- 专业: 微生物资源与分类学
2楼2014-02-18 13:14:51
yipan
铜虫 (职业作家)
- MolEPI: 1
- 应助: 214 (大学生)
- 金币: 16704.4
- 散金: 275
- 红花: 6
- 帖子: 4226
- 在线: 195.9小时
- 虫号: 2743878
- 注册: 2013-10-22
- 性别: GG
- 专业: 整合生物学
★ ★ ★ ★ ★ ★
求高手指点(金币+1): 谢谢参与
gyesang: 金币+5, 鼓励回帖交流！ 2014-02-18 17:57:49
求高手指点(金币+1): 谢谢参与
gyesang: 金币+5, 鼓励回帖交流！ 2014-02-18 17:57:49
|
1)大质粒(大于15kb)容易受损，故应采用漫和裂解法从细胞中释放出来。将细菌悬于蔗糖等渗溶液中，然后用溶菌酶和EDTA进生处理，破坏细胞壁和细胞外膜，再加入SDS一类去污剂溶解球形体。这种方法最大限度地减小了从具有正压的细菌内部把质粒释放出来所需要的作用力。 2)可用更剧烈的方法来分离小质粒。在加入EDTA后，有时还在加入溶菌酶后让细菌暴露于去污剂，通过煮沸或碱处理使之裂解。这些处理可破坏碱基配对，故可使宿主的线状染色体DNA变性，但闭环质粒DNA链由于处于拓扑缠绕状态而不能彼此分开。当条件恢复正常时，质粒DNA链迅速得到准确配置，重新形成完全天然的超螺旋分子。 3)一些大肠杆菌菌株(如HB101的一些变种衍生株)用去污剂或加热裂解时可释放相对大量的糖类，当随后用氯化铯-溴化乙锭梯度平衡离心进行质粒纯化时它们会惹出麻烦。糖类会在梯度中紧靠超螺旋质粒DNA所占位置形成一致密的、模糊的区带。因此很难避免质粒DNA内污染有糖类，而糖类可抑制多种限制酶的活性。故从诸 如HB101和TG1等大肠杆菌蓖株中大量制备质粒时，不宜使用煮沸法。 4)当从表达内切核酸酶A的大肠杆菌菌株(endA+株，如HB101)中小量制备质粒时，建议不使用煮沸法。因为煮沸不能完全灭活内切核酸酶A，以后在温育(如用限制酶消化)时，质粒DNA会被降解。但如果通过一个附加步骤(用酚:氯仿进行抽提)可以避免此问题。 |
3楼2014-02-18 13:18:20
4楼2014-02-18 13:19:00