应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 从hek293细胞里面克隆tumatatin，始终扩不出来，求高手指点一下
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
101/1返回列表
查看: 1221  |  回复: 9
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

renkeyixin

新虫 (初入文坛)

[求助] 从hek293细胞里面克隆tumatatin，始终扩不出来，求高手指点一下 已有2人参与

从hek293细胞里面克隆tumatatin，引物和退火温度都参照文献上的，始终扩增不出目的条带，温度也换了好几个了，别人都是从hek293细胞里面能够扩增出来的，求高手指点
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2014-02-17 11:00:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

西门吹雪170

荣誉版主 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-02-18 11:50:22
扩cDNA吗？如果是的话，很有可能你的模板有问题
赞一下 回复此楼
植根于内心的修养；无需提醒的自觉；以约束为前提的自由；为别人着想的善良
2楼2014-02-17 18:41:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

renkeyixin

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 西门吹雪170 at 2014-02-17 18:41:40
扩cDNA吗？如果是的话，很有可能你的模板有问题

是的，我的RNA提的应该还可以，琼脂糖胶三条带，OD260/280也都在正常范围内，逆转录试剂盒也是用的比较新的(别人用过扩增其他的基因没有问题)，那到底是哪里除了问题？？？？你从hek293细胞里面扩增过tumstatin吗？求指点一下
赞一下 回复此楼
3楼2014-02-26 16:40:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

西门吹雪170

荣誉版主 (职业作家)
引用回帖:
3楼: Originally posted by renkeyixin at 2014-02-26 16:40:17
是的，我的RNA提的应该还可以，琼脂糖胶三条带，OD260/280也都在正常范围内，逆转录试剂盒也是用的比较新的(别人用过扩增其他的基因没有问题)，那到底是哪里除了问题？？？？你从hek293细胞里面扩增过tumstatin吗？ ...

呃，我没有从hek293中扩过，建议参考其他文献，换个引物试试
赞一下 回复此楼
植根于内心的修养；无需提醒的自觉；以约束为前提的自由；为别人着想的善良
4楼2014-02-26 16:59:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

renkeyixin

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 西门吹雪170 at 2014-02-26 16:59:40
呃，我没有从hek293中扩过，建议参考其他文献，换个引物试试...

已经换过引物了，rna也重新提过。。。还是扩不出来
赞一下 回复此楼
5楼2014-02-26 17:38:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

如果单纯是克隆tumatatin这个基因，你不一定只从293细胞里面扩增，考虑到基因表达丰度的问题，你可以多提几个细胞系的RNA，然后逆转录成cDNA，把他们mix做成pool后再扩增你的基因，这样能增加扩增出tumatatin基因的机会
赞一下 回复此楼
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
6楼2014-02-26 17:56:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

西门吹雪170

荣誉版主 (职业作家)
引用回帖:
6楼: Originally posted by gyesang at 2014-02-26 17:56:04
如果单纯是克隆tumatatin这个基因，你不一定只从293细胞里面扩增，考虑到基因表达丰度的问题，你可以多提几个细胞系的RNA，然后逆转录成cDNA，把他们mix做成pool后再扩增你的基因，这样能增加扩增出tumatatin基因的 ...

还是版主厉害
回复此楼
植根于内心的修养；无需提醒的自觉；以约束为前提的自由；为别人着想的善良
7楼2014-02-26 19:39:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

renkeyixin

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by gyesang at 2014-02-26 17:56:04
如果单纯是克隆tumatatin这个基因，你不一定只从293细胞里面扩增，考虑到基因表达丰度的问题，你可以多提几个细胞系的RNA，然后逆转录成cDNA，把他们mix做成pool后再扩增你的基因，这样能增加扩增出tumatatin基因的 ...

这个基因在肺肾来源的细胞系中表达，我们实验室符合要求的就只有hek293
赞一下 回复此楼
8楼2014-02-26 20:01:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

renkeyixin

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by gyesang at 2014-02-26 17:56:04
如果单纯是克隆tumatatin这个基因，你不一定只从293细胞里面扩增，考虑到基因表达丰度的问题，你可以多提几个细胞系的RNA，然后逆转录成cDNA，把他们mix做成pool后再扩增你的基因，这样能增加扩增出tumatatin基因的 ...

请问版主有没有克隆过tumstatin
赞一下 回复此楼
9楼2014-02-26 20:13:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主
引用回帖:
9楼: Originally posted by renkeyixin at 2014-02-26 20:13:34
请问版主有没有克隆过tumstatin...

没有哦
回复此楼
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
10楼2014-02-27 11:02:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 renkeyixin 的主题更新
101/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 材料与化工272求调剂 +4 阿斯蒂芬2004 2026-03-28 4/200 2026-03-28 09:15 by 乐呵呵的追梦人
[考研] 311求调剂 +8 lin0039 2026-03-26 8/400 2026-03-28 08:00 by Iveryant
[考研] 材料求调剂 一志愿哈工大总分298分，前三科223分 +5 dongfang59 2026-03-27 5/250 2026-03-28 04:53 by wxiongid
[考研] 0856材料化工调剂 总分330 +10 zhubinhao 2026-03-27 10/500 2026-03-28 03:34 by fmesaito
[考研] 一志愿211院校 344分 东北农业大学生物学学硕，求调剂 +5 丶风雪夜归人丶 2026-03-26 8/400 2026-03-27 19:22 by 丶风雪夜归人丶
[考研] 一志愿北京化工大学 070300 学硕 336分 求调剂 +9 vv迷 2026-03-22 9/450 2026-03-27 15:59 by 不吃魚的貓
[考研] 一志愿郑大085600，310分求调剂 +5 李潇可 2026-03-26 5/250 2026-03-27 11:14 by 不吃魚的貓
[考研] 一志愿吉大071010，316分求调剂 +3 xgbiknn 2026-03-27 3/150 2026-03-27 10:36 by guoweigw
[考研] 一志愿陕师大生物学071000，298分，求调剂 +5 SYA！ 2026-03-23 5/250 2026-03-27 09:29 by 不吃魚的貓
[考研] 316求调剂 +5 江辞666 2026-03-26 5/250 2026-03-27 08:08 by hypershenger
[考研] 【双一流院校新能源、环境材料，材料加工与模拟招收大量调剂】 +4 Higraduate 2026-03-22 8/400 2026-03-26 20:34 by Higraduate
[考研] 生物学 296 求调剂 +4 朵朵- 2026-03-26 6/300 2026-03-26 19:01 by 不吃魚的貓
[考研] 289求调剂 +17 硕星赴 2026-03-23 17/850 2026-03-26 16:18 by 不吃魚的貓
[考研] 求调剂 +3 QiMing7 2026-03-25 3/150 2026-03-25 21:13 by 给你你注意休息
[考研] 生物学学硕求调剂 +7 小羊睡着了? 2026-03-23 10/500 2026-03-25 02:24 by 清风拂扬。 m
[考研] 300分，材料，求调剂，英一数二 +5 超赞的 2026-03-24 5/250 2026-03-24 21:07 by 星空星月
[考研] 材料专硕找调剂 +5 哈哈哈吼吼吼哈 2026-03-23 5/250 2026-03-24 19:07 by 了了了了。。
[基金申请] 请教下大家 2026年国家基金申请是双盲审吗？ +3 lishucheng1 2026-03-22 5/250 2026-03-24 08:22 by gltch
[考研] 环境学硕288求调剂 +8 皮皮皮123456 2026-03-22 8/400 2026-03-23 23:47 by 热情沙漠
[考研] 070300，一志愿北航320求调剂 +3 Jerry0216 2026-03-22 5/250 2026-03-23 09:16 by 。。堂堂
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭