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xinr2010

金虫 (小有名气)

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专业: 基因表达调控与表观遗传学

[求助] 求助，流感嗜血杆菌怎么培养啊？！！已有5人参与

小弟要开始做流感嗜血杆菌了，培养了近一周，还没培养出来，郁闷啊！！！
不想死在第一关，连菌都没出来，多郁闷啊，还请各位哥哥姐姐帮帮忙，教小弟把菌培出来。。。。。。

我看文献说固体培养基要用CO2，所以选择了液体培养基，用的是sBHI，将BHI121度高压15min，再加入事先配好的hemin溶液及NAD溶液，再接菌。

菌摇了一天没出来，问题如下：
1 sBHI中添加的hemin和NAD浓度到底分别多少，这两种物质溶液该如何配置？
2 摇这种菌需要多长时间啊？
3 固体培养不用CO2，可以么？
4 除了sBHI外，还有没有其他方法液体培养这种菌？

谢谢了

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1楼2014-02-14 09:39:28

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toxicpeach

木虫 (正式写手)

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性别: MM
专业: 免疫学研究新技术与新方法

先用固体万古霉素抗性巧克力琼脂培养基在5%CO2条件下分离，没有CO2培养箱可以用烛缸法代替（干燥器里面放一支燃烧的蜡烛，放入平板，盖上盖子即可），24 h长出之后，可以点种转接一个万古霉素抗性巧克力平板，同时点种血平板，一一对应，前者生长后者不生长的怀疑嗜血杆菌，可以用卫星试验或者纸片法确证，需要X+V为流感嗜血杆菌，只需要V的为副流感嗜血杆菌，可以挑单菌落接种加X和V或单独V因子的BHI培养基，沉淀生长者为正常，若有浑浊，可能不纯，继续前法分离，直至菌落为纯菌，可16S rRNA基因PCR测序。