| 查看: 1919 | 回复: 20 | |||
| 当前主题已经存档。 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
lybio金虫 (正式写手)
|
[交流]
不需要加入引物进行PCR的问题
|
||
| 分别用两对引物扩增出两条目的DNA片断，这两条链5端和3端有20个互补碱基。现在以扩增出的这两条DNA链，互为模板和引物，不需要另加引物，扩增一段长的链。想请教有经验的人，反应体系一般是怎样的？谢谢！ |
回复此楼» 猜你喜欢
309求调剂
已经有8人回复
-
一志愿南航 335分 | 0856 | GPA 4.07 | 有科研经历
已经有8人回复
-
求调剂
已经有5人回复
-
求化学调剂
已经有5人回复
-
085600，材料与化工321分求调剂
已经有10人回复
-
0703 化学 求调剂，一志愿山东大学 342 分
已经有5人回复
-
一志愿南开大学0710生物学359求调剂
已经有3人回复
-
085600，专业课化工原理，320分求调剂
已经有4人回复
-
材料与化工272求调剂
已经有16人回复
-
290求调剂
已经有3人回复
lihegang2000
铁杆木虫 (正式写手)
- 应助: 4 (幼儿园)
- 金币: 6452.8
- 散金: 300
- 红花: 4
- 帖子: 631
- 在线: 377.6小时
- 虫号: 311541
- 注册: 2006-12-30
- 性别: GG
- 专业: 免疫遗传学
★ ★ ★
asr(金币+3,VIP+0)::P 多谢，欢迎常来交流！
asr(金币+3,VIP+0)::P 多谢，欢迎常来交流！
|
1.两条片段回收纯化应该是必要的，避免干扰嘛 2.关于模板的量，你的比例应该是对的。我的反应体系是100微升，其中模板总量为10微升，引物各3微升，dNTP 3微升，EX-Taq酶1微升，DMSO 10微升，10×Ex buffer 10微升，加水60微升补足。DMSO用来提高扩增特异性的。 3.反应条件：（我是将230bp的片段与875bp片段重叠延伸得到1077bp片段，所以相对容易些，呵呵。） ①95度预变性5分钟②95度50秒③50度2分钟④72度3分钟⑤最后72度延伸5分钟。 ②-④循环30次 建议退火温度在50-60度之间设梯度，摸条件。延伸时间可以适当延长，你的片段长嘛 |
9楼2008-01-21 19:09:53
2楼2008-01-18 18:40:59
lybio
金虫 (正式写手)
- 应助: 2 (幼儿园)
- 金币: 1315.9
- 散金: 20
- 帖子: 399
- 在线: 80.9小时
- 虫号: 284636
- 注册: 2006-10-14
- 性别: MM
- 专业: 生物化工与食品化工
3楼2008-01-18 23:32:26
skkyy88888
铜虫 (著名写手)
- 应助: 5 (幼儿园)
- 金币: 142
- 散金: 1521
- 红花: 1
- 沙发: 1
- 帖子: 2340
- 在线: 216.2小时
- 虫号: 277762
- 注册: 2006-09-09
- 专业: 生物化学
4楼2008-01-19 11:44:17
